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食品安全突发事件频率高是近年来食品安全问题的一个显著特点,在各种食品安全事件中,细菌性食物中毒则是食物中毒的重要因素。常见的食源性致病菌主要有金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核增生李斯特氏菌、致泻性大肠杆菌等。目前,国内检测食品中致病菌主要采用传统的培养方法,其操作繁琐,检测时间较长,通常需要一周才能完成,且灵敏度较低。近年来,针对某一种或一类致病菌的检验方法被建立起来,但是一旦检测的方向有误就会造成时间和药品的浪费。因此,急需建立一种快速有效且通量较高的检测方法。为建立一种同时检测四种常见动物源致病菌的PCR方法。本研究针对大肠杆菌的（16s-23s rRNA）基因、金黄色葡萄球菌的（nuc）基因、单增李斯特氏杆菌的（hlyA）基因以及沙门氏菌的（invA）基因分别设计合成了四对特异性引物,PCR扩增的目的基因片段分别为662 bp、484 bp、372 bp、284 bp。试验过程中对多重反应体系中引物添加量、镁离子浓度、dNTP添加量及退火温度、延伸温度等影响要素进行优化,确定了适宜的多重反应体系和扩增程序,其反应体系为10×PCR buffer 5μL,Mg2+（25mM）3μL,dNTP（25 mM）4μL,Taq酶（2.5 U）1μL,模板各2μL,引物按文中所述终浓度各1.5μL,无菌双蒸水补齐至50μL。多重PCR扩增程序为:94℃起始变性5 min,94℃变性45 s,57℃退火1 min,70℃延伸1 min 30 s,扩增32个循环,最后一个循环于70℃延伸20 min。建立的多重PCR方法具有敏感、特异、准确、快速的优点,检测时间为5h左右。为研发同时检测人畜共患病食源性主要致病菌即大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏杆菌及沙门氏菌的试剂盒奠定了基础。