应用实时定量PCR技术对支气管哮喘患儿STAT1的表达水平的研究

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[目的]   1.比较广东深圳哮喘患儿与非哮喘疾病患儿的外周血STAT1基因表达的差异;   2.探讨STAT1基因与广东深圳地区哮喘患儿的相关性,进一步研究小儿哮喘的病因和病理生理机制,为评估小儿哮喘风险度提供有力依据。   [方法]   本实验采用病例-对照研究方法。于采血当日的同一时间抽取3ml血液,在2小时内分离淋巴细胞,并保存于Trizol中,将30例哮喘患几RNA归为实验组,将22例非哮喘疾病患儿RNA归为对照组,冰冻运输至深圳市欣海凌生物科技有限公司。通过实时定量聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)进行STAT1基因的分析:总RNA提取和纯化,电泳鉴定,反转录,扩增效率一致性检测,RT-PCR扩增。运用标准曲线、融解曲线、扩增曲线对STAT1基因进行分析,利用公式RQ=2-△△CT对两组患儿该基因进行相对定量分析。同时,对两组实验对象年龄进行差异性分析。   [结果]   1.哮喘组与对照组之间的年龄无统计学差距,具有可比性。   2.扩增效率一致性分析说明STAT1和管家基因β-actin的扩增效率一致,可以利用公式2-△△CT×100%进行实验的结果分析。   3.哮喘组STAT1 mRNA表达水平明显高于对照组(3.01±2.66,0.76±0.68),两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。   [结论]   STAT1基因在支气管哮喘患儿中的研究表明,外周血STAT1 mRNA表达水平上哮喘组高于对照组,可能为广东深圳地区小儿支气管哮喘的易感位点。
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