本文以工业化的细胞株和生产工艺为基础,研究培养过程中CHO细胞所生产rhEPO蛋白的糖基化变化规律以及影响因素,以期对工业过程起到理论指导作用。首先,将工业细胞株在静置培养条件下培养,发现随着培养时间的延长,培养上清中的rhEPO蛋白的糖基化质量逐渐降低,使用等电聚焦和免疫共沉淀的方法,发现这一现象是由于rhEPO蛋白N-糖链末端的唾液酸随着培养时间的延长而逐渐减少造成的。同时,随着培养时间的延长,细胞存活率逐渐降低,培养上清中的唾液酸酶活性逐渐升高。随后考察了工厂灌注培养过程中该细胞株所生产rhEPO的质量变化,发现在无血清培养初期,蛋白的唾液酸含量很快下降到较低水平,同时细胞存活率降低,胞外上清中唾液酸酶的活性稳定存在。通过以上的研究,发现在培养过程中唾液酸酶对于CHO所生产的rhEPO蛋白质量有明显影响,通过添加唾液酸类似物,发现抑制唾液酸酶活性可以改善细胞所生产rhEPO蛋白的N-糖基化质量。本文考察了正丁酸钠对于CHO细胞所生产rhEPO的糖基化以及CHO细胞唾液酸酶表达和活性的影响,发现添加正丁酸钠可以显著降低CHO细胞内的唾液酸酶的转录水平和胞外唾液酸酶的活性,有助于改善细胞所产rhEPO产品的质量,但是对于细胞存活率有不利影响。