[目 的]对松萝胺进行结构修饰,得到松萝胺的衍生物,对衍生物进行抗癌活性筛选并对具有抗癌活性的产物进行毒理学安全性评价,了解该化合物的毒作用性质及靶器官,为后续的药物开发提供科研资料。[方 法]1.以多种有机酸作为反应底物,4-二甲氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine,DMAP)作为化学反应的催化剂,N,N’-二异丙基碳二酰亚胺(N,Napos;-Diisopropylcarbodiimide,DIC)作为反应过程中的脱水剂,分别与松萝胺进行酰化反应,制备衍生物。2.以体外癌细胞的抑制率为指标筛选抗癌活性产物,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)对松萝胺的衍生物进行抗癌活性筛选,确定有抗癌活性的产物。3.采用溶剂萃取、硅胶柱层析等技术对抗癌活性产物进行分离纯化。4.采用核磁共振技术,进行氢谱、碳谱检测,结合质谱确定化合物的结构及分子量。5.采用四因素三水平正交实验,优化抗癌活性产物松萝烟酰胺的合成条件。6.采用紫外分光光度计法,测定松萝烟酰胺在不同溶剂中的溶解度,并与原药进行对比,分析衍生物在溶解度方面的变化。7.采用体外抗肿瘤活性检测试验,用MTT法测试不同浓度的松萝烟酰胺对人鼻咽癌细胞(CNE2)、人神经胶质瘤细胞(U-251)及人结肠癌细胞(HCT-116)的生长抑制作用。8.毒理学安全性评价:采用最大耐药量法进行急性毒性试验,采用小鼠精子畸形试验和小鼠骨髓细胞微核试验观察遗传毒性,采用30天喂养试验检测短期重复给药的毒性损害。[结 果]1.薄层色谱检测表明,松萝胺能与苯甲酸、烟酸、肉桂酸、邻甲基苯甲酸、1-萘甲酸、3-苯丙酸进行酰化反应并生成衍生物。2.烟酸与松萝胺反应能形成具有明显体外抗癌作用的衍生物。3.烟酸与松萝胺反应形成的抗癌活性衍生物分子式为C24H20N207,分子量448,分子结构为E)-N-(1-(6-乙酰基-7,9-二羟基-8,9b-二甲基-1,3-二氧代-3,9b-二氢二苯并[b,d]呋喃-2(1-H)-亚烷基)乙基)异烟酰胺,中文名为松萝烟酰胺。4.松萝烟酰胺的最佳合成条件为松萝胺与烟酸的摩尔之比为1:1.5,松萝胺与DMAP的摩尔比为1:0.2,反应温度20°,反应时间96 h,产率为28.72%。5.松萝烟酰胺在正辛醇、甲醇、无水乙醇、75%乙醇及50%乙醇溶液中的饱和溶解度分别为 2.232±0.002、1.453±0.002、1.581±0.001、1.758±0.002、0.371±0.001 mg/ml,松萝胺在上述溶液中的饱和溶解度依序为2.085±0.001、2.533±0.072、3.592±0.029、1.001±0.011、0.219±0.006 mg/ml。6.松萝烟酰胺在浓度为0.625、1.25、2.5、5.0、10.0 μmol/L条件下对CNE2 作用 72 h 的抑制率为-0.61±3.12%、22.91±20.84%、87.02±7.47%、91.46±4.73%、93.06±4.10%;对 U-251 作用 72 h 的抑制率为-1.64±3.79%、19.01±13.91%、68.09±11.65%、85.54±5.41%、91.97±2.01%;对 HCT-116 作用 72 h 的抑制率为 14.97±3.35%、30.77±2.86%、87.99±2.66%、99.91±0.08%、99.86±0.10%。松萝烟酰胺对 CNE2、U-251、HCT-116 的 IC50 分别为 1.68±0.51 μmol/L、2.14±0.41μmol/L、1.93±0.13μmol/L。7.在经口灌胃急性毒性试验中,昆明种小鼠在最大给药剂量为10 g/kg时,未出现死亡和明显的毒性反应。8.灌胃给药松萝烟酰胺剂量为1.25、2.5、5.0 g/kg时,小鼠的精子畸形率分别为2.02±0.12%、2.14±0.24%、2.13±0.18%,与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。9.灌胃给药松萝烟酰胺剂量为1.25、2.5、5.0 g/kg时,雄性小鼠微核率分别为2.4%、2.6%、4.0%,雌性小鼠骨髓细胞微核率为3.0%、3.4%、4.2%,松萝烟酰胺组小鼠的骨髓细胞微核率与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05)。10.经口给药30天喂养试验,松萝烟酰胺(0.65 g/kg、1.3 g/kg、2.6 g/kg)组雌雄小鼠体重、谷丙转氨酶、总蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白水平分别与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),组织病理切片未见异常改变。与正常对照组比较,给药雄性小鼠高剂量(松萝烟酰胺2.6 g/kg)组白细胞、淋巴细胞及中性粒细胞值下降(P<0.05),尿素、尿酸水平升高(P<0.05),肝脏系数增大(P<0.05)。中剂量(1.3 g/kg)松萝烟酰胺组红细胞、血红蛋白及白蛋白值显著下降(P<0.05),尿素水平显著升高(P<0.05),肝、脾及睾丸系数明显增大(P<0.05)。低剂量(0.625 g/kg)松萝烟酰胺组高密度脂蛋白水平下降(P<0.05)。与正常对照组相比,给药雌性小鼠高剂量(松萝烟酰胺2.6 g/kg)组红细胞、血红蛋白、白细胞、淋巴细胞、总胆固醇及高密度脂蛋白水平显著下降(P<0.05),谷草转氨酶、肌酐和尿酸水平显著升高(P<0.05)。中剂量(松萝烟酰胺1.3 g/kg)组血红蛋白水平下降(P<0.05),尿酸水平升高(P<0.05)。低剂量(松萝烟酰胺0.625g/kg)组中性粒细胞水平下降(P<0.05),尿酸水平升高(P<0.05)。[结 论]1.松萝胺与烟酸能通过酰化反应形成具有抗癌活性的产物,中文名为松萝烟酰胺。分子式为C24H20N2O7。最佳合成条件为n(松萝胺):n(烟酸)=1:1.5,n(松萝胺):n(4-二甲氨基吡啶)=1:0.2,反应温度20°,反应时间48h且烟酸与松萝胺的比例为影响产率的主要因素。2.松萝烟酰胺在50%乙醇、75%乙醇及正辛醇溶剂中的饱和溶解度较原药松萝胺高,在甲醇和无水乙醇溶剂中的溶解度较原药低。3.松萝烟酰胺具有显著的体外抗肿瘤活性。4.松萝烟酰胺小鼠经口急性毒性试验属于无毒级,5.现有资料尚不能判断松萝烟酰胺有遗传毒性,6.经口给予高剂量的松萝烟酰胺可能影响小鼠的造血功能,并出现肾毒性。