LncRNA-MIAT在TNF-α介导的血管炎症中的表达及作用

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目的:体外观察血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激下,细胞内长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(long non-coding RNA myocardial infarction associated transcript,LncRNA-MIAT)的表达变化,并探讨LncRNA-MIAT对ECs和VSMC炎症的调控作用。方法:以TNF-α诱导ECs和VSMC炎症状态,采用Western Blot、PCR及q RT-PCR方法分别检测ECs和VSMC炎症状态下细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和LncRNA-MIAT的表达情况。应用LncRNA-MIAT的小干扰核糖核酸(si RNA MAIT)转染ECs和VSMC,观察LncRNA-MIAT敲低对ICAM-1和VCAM-1表达的影响。通过划痕实验,观察ECs和VSMC的迁移功能。结果:1.(1)内皮细胞PCR结果:与空白对照相比,加入lncRNA-MIAT引物的条带明显,提示ECs中表达LncRNA-MIAT,不同引物浓度的条带亮度的比较差异不明显,提示当引物浓度增加时,LncRNA-MIAT表达量增加不明显。(2)平滑肌细胞PCR结果:与空白对照相比,加入lncRNA-MIAT引物的条带明显,提示VSMC中表达LncRNA-MIAT,不同引物浓度的条带亮度的比较差异不明显,提示当引物浓度增加时,LncRNA-MIAT表达量增加不明显。2.(1)内皮细胞q RT-PCR结果:随着TNF-α刺激时间延长和刺激浓度增高,LncRNA-MIAT表达呈逐渐上升趋势。TNF-α刺激24 h、48 h其他刺激时长比较,lncRNA-MIAT表达量增多;TNF-α刺激浓度1.000 ng/ml、10.000 ng/ml与其他刺激浓度比较,lncRNA-MIAT表达量均增多,差异均具有统计学意义。(2)平滑肌细胞q RT-PCR结果:随着TNF-α刺激时间延长和刺激浓度增高,LncRNA-MIAT表达呈逐渐上升趋势。刺激12 h、24 h、48h其他刺激时长比较,lncRNA-MIAT表达量增多;刺激浓度10.00 ng/ml、20.000 ng/ml与其他刺激浓度比较,lncRNA-MIAT表达量均增多,差异均具有统计学意义。3.(1)内皮细胞RNA干扰结果:si RNA MAIT 48h与si RNA Scramble比较,lncRNA-MIAT表达量明显下降,差异具有统计学意义;si RNA MAIT 48 h与si RNA MAIT 24 h相比,lncRNA-MIAT表达量下降,差异具有统计学意义。(2)平滑肌细胞RNA干扰结果:si RNA MAIT 24h与si RNA Scramble比较,lncRNA-MIAT表达量明显下降,差异具有统计学意义;si RNA MAIT 48 h与si RNA Scramble比较,lncRNA-MIAT表达量明显下降,差异具有统计学意义。4.(1)内皮细胞中ICAM-1的Western Blot结果:浓度为1.000 ng/ml的TNF-α刺激ECs后,ICAM-1的表达与空白对照相比显著增高,差异有统计学意义。应用si RNA MAIT转染ECs 48 h后,应用浓度为1.000 ng/ml TNF-α刺激ECs后,与阳性对照相比,ICAM-1表达量被明显抑制,差异有统计学意义;与空白对照相比,差异无统计学意义。(2)内皮细胞中VCAM-1的Western Blot结果:浓度为1.000 ng/ml的TNF-α刺激ECs后,VCAM-1的表达与空白对照相比显著增高,差异有统计学意义。应用si RNA MAIT转染ECs 48 h后,应用浓度为1.000 ng/ml TNF-α刺激ECs后,与阳性对照相比,VCAM-1表达量被明显抑制,差异有统计学意义;与空白对照相比,差异无统计学意义。(3)平滑肌细胞中ICAM-1的Western Blot结果:浓度为10.00 ng/ml的TNF-α刺激VSMC后,ICAM-1的表达与空白对照相比显著增高,差异有统计学意义。应用si RNA MAIT转染VSMC 48 h后,应用浓度为10.00 ng/ml TNF-α刺激VSMC后,与阳性对照相比,ICAM-1表达被抑制,差异有统计学意义;与空白对照相比,差异无统计学意义。5.(1)内皮细胞划痕实验结果:浓度为1.000 ng/ml TNF-α刺激ECs培养24h后,与空白对照相比,ECs迁移距离延长,差异有统计学意义。si RNA MAIT敲低后的ECs加入浓度为1.000ng/ml TNF-α刺激ECs培养24h后,与空白对照相比,ECs迁移明显被抑制,差异有统计学意义。(2)平滑肌细胞划痕实验结果:浓度为10.00 ng/ml TNF-α刺激VSMC培养24h后,与空白对照相比,细胞迁移距离明显延长,差异有统计学意义。si RNA MAIT敲低后的VSMC加入浓度为10.00 ng/ml TNF-α刺激培养24h后,与空白对照相比,VSMC迁移明显被抑制,差异有统计学意义。结论:LncRNA-MIAT可能参与血管的炎症反应,并可能起到促炎作用。
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