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根瘤菌与豆科植物的共生固氮作用避免了人工施用氮肥的种种弊端,在农业生产中有重要研究和利用价值。目前对共生固氮的研究仍聚焦在其具体分子机制。根瘤菌合成的结瘤因子（NF）是共生起始的关键信号分子,除此之外,根瘤菌中很多基因均参与共生过程,保证根瘤菌可以正常分化并行使固氮功能,包括nod基因,nif基因,fix基因及一些lps基因等。Mesorhizobium loti MAFF303099与模式豆科植物百脉根（Lotus japonicus）的共生在共生固氮体系中极具代表性,对揭示共生固氮机理有重要的研究价值。MAFF303099是中慢生根瘤菌属内最早完成全基因组测序的菌株。本课题以MAFF303099为研究对象,利用转座子Tn5-sacB转座技术得到了约10,000个MAFF303099的转座接合子,构建突变体库,旨在构建并筛选百脉根根瘤菌MAFF303099中共生相关基因的突变体,更好地阐明共生机制。主要研究结果如下:1.测定百脉根根瘤菌MAFF303099的生长曲线,确定了其在TY培养基中培养时,对数生长期在OD600为1.0左右;测定MAFF303099对Km的敏感性,确定Km筛选浓度为50μg/mL。2.利用三亲本杂交方法将含Tn5-sacB转座子的质粒pMH1701转入目的菌株MAFF303099,转化效率为3.75×10-5,并挑取复筛后的约10,000转座接合子用96孔板培养并保藏,构建MAFF303099的转座子随机插入突变体库。3.利用PCR、抗性筛选、蔗糖筛选验证了复筛后的转座接合子中均有转座子Tn5-sacB插入在其基因组中,进一步通过TAIL-PCR的方法在16个突变体中鉴定出了10个转座子插入基因编码框的突变体,并确定了其具体插入位点,证实了突变体库构建的可行性。4.探索并构建了一套能从MAFF303099突变体库中快速筛选目的突变体的方法,成功筛选到了结瘤因子相关合成基因nodB的突变体,命名为MAFF303099/nodB-1,且确定了Tn5-sacB在nodB基因中的具体插入位点。5.对MAFF303099/nodB-1进行共生相关表型的分析,发现MAFF303099/nodB-1不能使百脉根结瘤;通过组织化学染色对百脉根NINpro-GUS转基因植株根部进行GUS染色,发现MAFF303099/nodB-1仍可以少量诱导LjNIN的表达,并形成极少数的侵入线（IT）结构。