恒定链（invariant chain,Ii）是一种非多态性Ⅱ型跨膜糖蛋白。Ii作为MHC-Ⅱ分子的伴侣蛋白,在抗原呈提通路中起着重要作用:（1）辅助MHC-Ⅱ类分子合成;（2）阻止MHC-Ⅱ类分子与内源性抗原肽结合,保护未成熟MHC-Ⅱ类分子;（3）作为MHC-Ⅱ类分子内化信号,调节其分选/内化。研究表明,Ii还与CD4+T细胞及B细胞的分化、成熟有很大关系。为探索Ii在免疫应答中的功能及其作用机理,本研究进行了小鼠Ii基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备。首先,根据GenBank中登录的小鼠Ii基因mRNA序列与载体pGEX-4T-1的多克隆酶切位点设计了一对上下游引物P1、P2,通过反转录-聚合酶链式反应技术,从小鼠脾脏组织总RNA中扩增出一条特异性基因片段,经HindⅢ单酶切鉴定,与GenBank中登录的小鼠Ii基因序列含有相同的单酶切位点。然后将该基因片段插入载体pGEX-4T-1多克隆位点,构建Ii的原核表达重组质粒。经质粒PCR和EcoRⅠ、SalⅠ双酶切鉴定,筛选出阳性克隆进行DNA序列测定。结果表明本实验成功克隆到小鼠Ii基因,长度为700bp,包含完整的开放阅读框,编码213个氨基酸。克隆所得到的小鼠Ii基因与GenBank中登录（登录号:NM010545、BC096435）的鼠Ii基因有5个核苷酸的差异,其同源性均为99.2%;与登录号为BC061489鼠Ii基因仅有一个核苷酸的差异,同源性为99.8%,所编码氨基酸序列均完全相同。其次,把经鉴定构建成功的重组质粒pGEX-4T-1-Ii转化到大肠杆菌BL21中,经1.0mmol/L IPTG的诱导在37℃表达,表达产物经SDS-PAGE凝胶电泳检测。结果表明,所克隆得到基因片段在大肠杆菌BL21中获得有效表达,表达产物主要是以包涵体形式存在的融合蛋白GST-Ii。所获得的融合蛋白分子量分别约为49.5KD,与预期结果相符。最后,通过对原核表达条件的优化,确定了最佳诱导时间和最佳诱导剂浓度。我们用优化的表达条件对含有pGEX-4T-1-Ii重组质粒的BL21菌进行了大量诱导表达,实验中使用反复冻融和超声波方法来裂解诱导表达菌,结合十二烷基肌氨酸钠法,提取了大量的可溶性GST-Ii融合蛋白。在对目标蛋白进行复性与纯化后,用其免疫家兔,制备了针对该蛋白的兔抗鼠多克隆抗体,ELISA和Western Blotting证明所制备的多克隆抗体具有良好的免疫活性和特异性。综上所述,本研究成功地克隆了小鼠Ii基因,对其进行了原核诱导表达,获得了大量的GST-Ii原核融合表达蛋白,并制备了针对该融合蛋白的多克隆抗体。这些都为进一步研究小鼠Ii分子免疫学功能及其应用提供了试验材料。