肝豆状核变性(Hepatolenticular degeneration，HLD)又称Wilson病(wilson’s disease，WD)，是一种重要的常染色体隐性遗传疾病，由于基因突变导致铜代谢障碍，铜在体内大量沉积而发病。本病可累及神经、肝脏、肾脏、血液等多个器官和系统，临床表现复杂，误诊率高达50％～90％，而以肝病首发者更甚。暴发性肝豆状核变性(wilsondisease presenting as fulminant hepatic failure，fulminant wilsonianhepatitis，fulminant wilson’s disease，FWD)是其中一种少见而严重的类型，预后极差，如不进行肝移植治疗，病死率几乎100％。FWD的诊断和治疗是临床工作中一个极为棘手的问题。国内外至今尚未见关于FWD采用内科方法抢救成功并进行病理检查及长期观察的报道，国外仅有1篇关于FWD患者基因突变研究的报道。研究目的1．系统观察、总结1例暴发型肝豆状核变性患者的临床特点、铜代谢异常、病理变化及治疗转归，为暴发型肝豆状核变性的诊断和治疗提供科学依据。2．系统分析该例暴发性肝豆状核变性患者及其直系亲属的WD基因突变，找出突变位点，阐明突变的遗传规律及其分子发病机制，初步探讨突变类型与临床的关系。研究方法1．采用D-青霉胺、血浆置换和糖皮质激素等内科综合治疗方法抢抢患者，定期检查患者的血尿常规、肝功能、铜代谢指标，病情允许时检查患者肝脏的病理变化，随访时间1年。2．采用PCR扩增后直接测序的方法检查患者及其直系亲属的的WD基因的全部外显子、外显子／内含子交界区、部分内含子，如没有发现突变，再检查5’-端调控序列。其主要步骤是：抽取外周血，酚氯仿法制备DNA，针对21个外显子及启动子自行设计引物，PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳后在紫外灯下割取目的条带，纯化回收PCR产物，对PCR产物测序、分析。研究结果1．采用内科综合治疗方法成功抢救1例暴发性肝豆状核变性，治疗随访1年，患者病情稳定，肝功能完全恢复正常。这一结果表明，如能早期诊断，采取驱铜、血浆置、糖皮质激素等换等综合治疗措施，至少对部分暴发性肝豆状核变性是有效的，抢救成功的患者，长期预后良好。这一结果对于暴发性肝豆状核变的治疗决策有重要参考价值。2．病后第4个月对患者进行肝活检，肝组织学检查证明已进展到肝硬化，暴发性肝豆状核变性实质上是在肝硬化基础上发生的广泛肝损伤。3．患者急性期铜蓝蛋白(197mg／L)显著高于恢复期(70mg／L)，证明肝脏炎症对铜蓝蛋白的浓度有重要影响。这提示，在肝病的鉴别诊断时，不要因为铜蓝蛋白正常而排除WD。患者尿铜高达8067μg／24h，尿铜显著增高对WD的诊断有重要意义。4．采用自行设计的引物和实验条件，成功地扩增了所有21个外显子，外显子／含子交界区。PCR扩增产物与预期的大小相同，直接测序结果与参照序列相同，说明引物设计正确，实验条件适当，实验结果可靠。5．在患者、患者的弟弟及父亲的WD基因18号外显子发现一个新的尚未报道的杂合错义突变：3884C→T(Ala1295Val)。此突变来源于患者的父亲。突变位于ATP7B的ATP绞链区，推测这是一个致病突变，该突变可能影响ATP的结合而引起ATP7B的功能障碍。6．在患者及其父母、弟弟的WD基因的17号内含子发现一个尚未报道的新的缺失突变：3700-23delg。这可能是一个多态。7．1～17、19、20、21号外显子均未发现突变。结论1．采用内科综合治疗方法成功抢救1例暴发性肝豆状核变性，治疗随访1年，患者病情稳定，这表明内科综合治疗方法至少对部分暴发性肝豆状核变性是有效的。这一结果对于暴发性肝豆状核变性的治疗决策有重要参考价值。2．病后4个月肝活检证实本例在病理上是在肝硬化基础上出现的广泛肝损伤。患者急性期铜蓝蛋白显著高于恢复期，提示不可因为铜蓝蛋白正常而排除肝豆状核变性。患者尿铜极度增高，对肝豆状核变性有重要诊断意义。3．在患者的WD基因18号外显子发现一个新的尚未报道的杂合突变：3884C→T(Ala1295Val)，此突变来源于患者的父亲。突变位于ATP7B的ATP绞链区，推测这是一个致病突变，该突变可能影响ATP的结合而引起ATP7B的功能障碍。在患者及父母、弟弟WD基因的17号内含子发现一个尚未报道的新的缺失突变：3700-23delg，这是一个多态的可能性大。1～17、19、20、21号外显子均未发现突变。