目的有研究发现,AR(androgen receptor,雄激素受体)是胃癌患者独立的不良预后因素,但是目前并无关于AR在胃癌中的分子机制的研究。肝癌中发现AR可以通过促进CCRK(cell cycle-related kinase,细胞周期相关激酶)的表达来促进肿瘤细胞的增殖。因此,胃癌中也可能存在着AR-CCRK通路来刺激肿瘤的发生。在本研究中我们将研究AR和CCRK在胃癌中的表达情况;研究AR和CCRK对胃癌细胞的影响,例如在细胞迁移、侵袭和增殖过程中的作用,研究胃癌中AR和CCRK之间的调控关系,进一步深入探讨AR和CCRK调控的下游信号通路,阐明其促进作用的分子机理。方法在本次研究中,我们采用了7株胃癌细胞(AGS,SGC7901,MKN45,MKN28,HGC27,BGC823,和MGC803)以及1株正常胃粘膜细胞(GES-1),通过慢病毒转染构建AR、CCRK过表达胃癌细胞和敲降AR、CCRK胃癌细胞。(1)通过q PCR和Western blot检测AR、CCRK在胃癌细胞和正常胃粘膜细胞中的表达水平、以及AR过表达、敲降AR胃癌细胞中CCRK、p-GSK3β、p-β-catenin和EGFR的表达水平。(2)通过Transwell实验检测AR、CCRK对胃癌细胞迁移和侵袭的影响。(3)通过平板克隆形成实验检测AR、CCRK对胃癌细胞增殖的影响。(4)分析TCGA数据库的591份胃癌样本中AR和CCRK基因表达量之间的相关性。(5)通过Ch IP实验检测AR蛋白是否与CCRK DNA之间相互作用。结果(1)AR m RNA在胃癌细胞中高表达,AR蛋白在胃癌细胞中高表达(除AGS胃癌细胞)。(2)CCRK m RNA在胃癌细胞中高表达,CCRK蛋白在胃癌细胞中高表达。(3)Transwell实验表明,AR过表达胃癌细胞的迁移能力和侵袭能力增强,而敲降AR胃癌细胞的迁移能力和侵袭能力减弱。在平板克隆形成实验中,结果显示AR过表达胃癌细胞的增殖能力增强,敲降AR胃癌细胞的增殖能力减弱。(4)Transwell实验表明,CCRK过表达胃癌细胞的迁移能力和侵袭能力增强,而敲降CCRK胃癌细胞的迁移能力和侵袭能力减弱。在平板克隆形成实验中,结果显示CCRK过表达胃癌细胞的增殖能力增强,敲降CCRK胃癌细胞的增殖能力减弱。(5)AR和CCRK的表达呈正相关;在Ch IP实验中,发现AR在胃癌细胞中特异性地与CCRK启动子结合。(6)AR过表达胃癌细胞中CCRK、p-GSK3β、p-β-catenin和EGFR的表达水平增加;而敲降AR胃癌细胞中CCRK、p-GSK3β、p-β-catenin和EGFR的表达水平降低。结论综上所述,我们发现AR、CCRK在胃癌中高表达,在胃癌细胞中AR会刺激CCRK的表达,促进GSK3β和β-catenin的磷酸化,促进EGFR的表达,促进胃癌细胞的迁移、侵袭和增殖,从而促进胃癌的发生与发展。