背景与目的：许多研究表明颅脑损伤所致的死亡，大多是由于脑干受损伤，脑干功能丧失的结果。原发性脑干损伤(Primary brain stem injury，PBSI)通常是指暴力作用于头部引起以脑干为主的损伤，并于伤后立即出现持续时间较长的意识丧失或死亡。脑干损伤后，其超微结构即发生改变，并可检测出多种物质，这些均为脑干损伤的诊断提供了科学依据。对原发性脑外伤导致的迟发性死亡，推断损伤经过时间就具有更重要的法医学意义。有研究者对脑干损伤早期损伤时间的推断进行了探讨。然而，脑干损伤后出现变化的物质多呈现峰状改变，实际工作中难于区别峰前值和峰后值。生长因子是一类有促进细胞生长、增殖、合成作用的蛋白质或多肽，鉴于它们与中枢神经系统发育以及神经组织损伤修复关系密切，本实验旨在研究内源性生长因子在脑干损伤中的表达及表达特点，探索脑干损伤后不同经过时间部分内源性生长因子的变化，通过形态学观察和图象定量分析，探索它们在原发性脑干损伤中随时间变化的规律。 材料和方法：动物随机分为对照组、脑干损伤组和死后损伤组。采用斜向下滑打击装置结合心电监护仪制造大鼠脑干损伤模型。脑干损伤组分为7组，分别于打击后于1小时、3小时、3天、7天、10天、14天取脑，60分钟内死亡者即刻取脑；死后损伤组于剪心处死后5分钟、10分钟打击，各组6只，共计60只。脑干进行石蜡包埋切片，苏木素-伊红染色，并运用免疫组化SABC法检测脑 汕头大学医学院硕士研究生毕业论文 干网状结构内TGF－pl、bFGF、PDGF－B表达改变情况。低倍镜下 在脑干网状结构内，随机选取4个视野，调至40倍镜下计算阳性 细胞数巳 取其平均值；并用 HPIASl 高清晰彩色病理图像细 胞测量系统进行图像分析，测量其灰度值。同时绘制变化曲线。 实验结果： l、脑干损伤组大鼠打击后，均出现短暂的呼吸心跳暂停，角 膜反射消失、抽搐、竖尾等体征，约5刁 秒后出现不规则呼吸及 心跳。心率明显减慢，且心津不齐；呼吸减慢变深，9只于60分 钟内死亡；36只于 1080分钟后逐渐苏醒，JO跳、呼吸逐渐平稳， 无再度昏迷。 2、大体病理改变及苏木素－伊红染色：脑干损伤组大鼠均未见 明显的脑组织挫伤，损伤死亡组中有1只发生颅骨骨折，大鼠中共 有5只见蛛网膜下腔少许出血；均未见明显的占位性血肿和脑受压 改变。苏木素－伊红染色见损伤早期脑干实质细胞水肿，细胞间隙 增宽，第3j天，基本恢复正常。部分标本于脑干中可见散在小灶 出血或点状出血，以及轻度脑组织水肿。死后损伤组及正常对照组 无明显改变。 3、免疫组化染色： l）TGFfi：TGFD 阳性物为棕黄色颗粒，位于胞浆中， 正常对照组及死后损伤组，脑干网状结构内阳性细胞极少；脑干损 伤死亡组TGF小 阳性细胞平均数门。54土l．72）及灰度值Q2．65 土 1．39）均较正常对照组3．63上0．88；19．79土 1．48）及死后损伤 组门．58土0．93；19．49上1．88）显著增加（P＜0刀1）。损伤组阳性细 胞不断增加，第3天达峰值，之后逐渐下降。 ．3－ 汕头大学医学院硕士研究生毕业论文 2）bFGF：正常对照组和死后损伤组，于脑干网状结构内仅见 有少量表达阳性的神经细胞；脑干损伤组脑干网状结构内见许多大 小不等、形态各异的阳性细胞：随着生存时间的延长旺＊F阳性细 胞增多，第3天达峰值。统计结果显示脑干损伤死亡组阳性细胞平 均数门．ZI土l．77）及阳性物平均灰度值Q4．42土0．63）与正常对 照组（5．16上0．96；ZO．of士1．61）及死后损伤组（5．42士1．17；1946 土1．73 ）比较均有显著差异吓功刀1人而后两者之间无显著性差异。 3）PDGF：在正常对照组及死后损伤组大鼠的脑干网状结构 的神经元仅见少许PDGF阳性细胞；脑干损伤组3小时PDGF阳性 细胞开始增多，至第7天达到峰值。统计学显示脑干损伤3小时组， PDGF在脑干网状结构中的阳性细胞数u了9士 0．98）及阳性物平均 灰度值（22．90上 l．12）与正常对照组（3．41i 0．65；19．75土 0．69）及 死后损伤组门．58上0．93；19二2土0．87）b较有显著差异性（P＜O．01）． 结论： 卜 脑干损伤后内源性生长因子合成和释放增加，提示它们在 脑干损伤后的适应和修复过程中发挥着活跃的作用； 2）内源性生长因子表达增强是机体在生活状态下对损伤及修 复的保护性生理反应，在夫去生命状态下机体则无此反应； 3）内源性生长因子在脑干网状结构内增多，是生前脑干损伤 的特异表现，这种改变可以作为法?