第一部分2007-2008年长沙地区急性下呼吸道感染住院儿童病毒谱调查目的:了解2007-2008年长沙地区急性下呼吸道感染(acute low respiratory tract infection,ALRTI)住院儿童常见呼吸道病毒的流行特点,为本地区儿童ALRTI的防治提供基础数据和科学根据。对象及方法:1、收集2007年9月-2008年8月在湖南省人民医院儿科医学中心诊断为ALRTI的住院患儿鼻咽抽吸物(Nasopharyngeal aspirates,NPAs)标本。2、采用RT-PCR方法检测呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(HRV)、流感病毒(IFVA、B型)、副流感病毒(PIV1-3型)、人偏肺病毒(hMPV)、冠状病毒-NL63 (HCoV-NL63)、冠状病毒-HKU1(HCoV-HKU1);采用PCR方法检测腺病毒(ADV)、博卡病毒(HBoV);采用巢式PCR方法检测多瘤病毒WU(WUPyV)和多瘤病毒KI(KIPyV),并对阳性标本进行基因测序以证实。3、对各种病毒在儿童ALRTI中的流行病学特点进行分析。结果:1、2007年9月-2008年8月共收集NPAs标本1165份,有871份检出了病毒,总检出率74.76% (871/1165),其中RSV最为常见,检出率为27.03%(315/1165);其次为HRV,检出率17.33%(202/1165);PIV3检出率13.73%(160/1165);HBoV检出率为8.66%(101/1165);hMPV检出率为6.52%(76/1165);KIPyV检出率为5.92%(69/1165);ADV检出率为4.46%(52/1165);IFVB检出率3.60%(42/1165);WUPyV检出率为3.51%(41/1165);IFVA检出率1.97%(23/1165);HCoV-HKU1、HCoV-NL63、PIV1及PIV2分别检出12份、3份、2份及7份,检出率分别为1.03%,0.25%,0.17%及0.60%。2、763例男性患者中病毒阳性检出581例(76.14%),女性402例中阳性检出290例(72.13%),男女之间病毒阳性检出率比较无统计学差异(χ~2=2.241,P=0.134);但PIV3,hMPV和HBoV的阳性检出率男多于女,其它无差异。3、采集标本的患儿年龄从出生后1天至<14岁,平均年龄15.45±17.85个月。1岁以下患儿病毒阳性检出率为75.37%(505/670);1~3岁患儿病毒阳性检出率为75.57% (263/348);3~5岁检出率为72.38%(76/105);≥5岁检出率为64.28%(27/42),阳性检出率在各年龄段之间有统计学差异(χ~2=10.934,P=0.027),尤以6月～年龄段检出最高,且不同病毒有各自年龄段分布特点。4、在研究期间内,病毒总的检出率在四季分布有统计学差异(χ~2=12.307,P=0.006),以冬季检出率最高,不同病毒的四季分布高峰有不同。结论:1、本研究期间内,ALRTI住院儿童病毒阳性检出率高达74.76%,表明病毒病原在长沙地区儿童ALRTI中占有重要地位。2、本研究首次报道了2007-2008年长沙地区ALRTI住院儿童病毒谱的构成其中RSV、HRV、PIV3占主要地位,近年新发现的HBoV和hMPV也有较高比例。3、病毒检出率在各年龄段之间有统计学差异,尤以6月～年龄段检出最高,且不同病毒有各自年龄段分布特点;病毒总检出率在男女之间无差异,而不同病毒有各自特点;冬季病毒总检出率最高,不同病毒的四季分布高峰有不同。第二部分2007-2008年人偏肺病毒在长沙地区急性下呼吸道感染住院儿童中的现状分析目的:了解2007-2008年长沙地区ALRTI住院儿童人类偏肺病毒(hMPV)感染的流行病学、临床特点及基因分型等情况,比较PCR扩增产物序列与GenBank中相应序列的差异,探讨不同基因型临床表现之间的差异,为进一步的防治hMPV的研究奠定基础。对象及方法:1、收集2007年9月-2008年8月在湖南省人民医院儿科医学中心诊断为ALRTI的住院儿童NPAs标本。2、采用RT-PCR方法检测hMPV M基因及F基因,并对阳性扩增产物进行连接、转化、克隆后测序。3、利用生物软件Dnastar将所测得的序列与GenBank中的hMPV参考株进行同源性比对及核苷酸、氨基酸序列变异分析,利用Mega软件完成进化分析并绘制基因进化树,并进行基因分型。4、对hMPV在ALRTI住院儿童中的流行病学和临床特点进行分析。5、探讨不同基因型临床表现之间的差异。结果:1、本研究1165例NPAs标本中检测到76例hMPV阳性扩增产物,检出率为6.52%。2、将阳性PCR产物进行序列测定及分析,发现其与GeneBank中已知标准株序列的同源在97-100%之间,有个别碱基的插入和突变,提示hMPV长沙株的核苷酸变异较小。hMPV亚基因型A2与B2的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别为86.06%-87.15%和81.14%-82.46%。hMPV A2亚基因型的不同长沙株之间核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别为98.91%-99.56%和98.58%-99.13%,而B2亚基因型之间分别为95.91%-97.98%及96.37%-97.38%。进化分析显示76例hMPV长沙株可分为A、B两个基因型,A型占94.73%(72/76),全部为亚基因型A2,B型占5.26%(4/76),全部为亚基因型B2,未发现亚基因型A1、B1。3、阳性检出患儿年龄从20天到12岁,平均年龄15.87个月。其中男性59例,女性17例,男女之比为3.47:1,男性较女性检出率高(χ~2=5.300 P<0.05),1岁以下患儿占63.15%,阳性检出率在春季(3、4、5月份)出现高峰,其中3、4月份最高,8、9、10月份未见检出。4、在hMPV阳性标本中同时还检出其它多种病毒阳性,混合感染高达57.89%,其中HBoV最多,其次是RSV;比较单一hMPV与混合其它病毒阳性检出病例的年龄、性别、发热、热程、喘息、呕吐、腹泻、有无基础疾病、住院天数等二者间均无差异。5、阳性检出病例的临床症状、体征和胸片表现与其它病毒感染相似,临床诊断包括支气管肺炎、毛细支气管炎、急性支气管炎、支气管哮喘合并肺部感染,其中支气管肺炎最多见。6、比较A、B两种基因型阳性检出病例的年龄、性别、发热、呕吐、腹泻、喘息、湿啰音、有无基础疾病、住院天数等二者间均无差异。结论:1、hMPV是长沙地区住院儿童ALRTI的重要病毒病原。2、2007-2008年hMPV长沙株核苷酸变异较小,有A2、B2两种不同基因型在长沙地区流行,以A2基因型为主。3、hMPV阳性检出患儿年龄主要集中在1岁以下;男多于女;在春季的3、4月为检出率高峰;临床表现与其它病毒感染相似,主要临床诊断为支气管肺炎;与其它病毒混合率57.89%,以HBoV和RSV最常见。