广西田七中人参皂苷Rg1的分离纯化及其脂质体的研究

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田七为广西传统道地药材之一,其所含的人参皂苷Rg1物质具有明显的抗凝血和抑制血小板聚集的作用,可作为脑血栓或中风的治疗药物。本论文采用乙醇回流提取法对广西田七进行提取,然后通过大孔吸附树脂法富集纯化人参皂苷Rgl,再通过离心薄层色谱仪制备出人参皂苷Rgl单体,并研究了人参皂苷Rg1脂质体制备方法,同时对其质量和稳定性进行了研究。实验内容及结果如下:1.通过比较回流法、超声法、浸渍法、微波萃取法四种提取方法对田七药材中三七总皂苷的提取得率的影响,得出最佳提取方法为回流法,提取得率为7.88%。提取方法为:提取溶剂为70%乙醇,用量为药材的8倍,80℃回流提取2次,每次2h。干膏得率为25.8%,干膏中人参皂苷Rg1的含量为13.37%。由此计算出回流提取法对于人参皂苷Rg1提取得率为3.45%,提取回收率为95.3%。2.采用D-101大孔树脂对田七乙醇提取物干膏进行初步分离,通过TLC定性检测收集人参皂苷Rg1纯度较高的解析液,合并,蒸干,得到的粗品纯度为56.7%。实验中通过比较不同型号大孔吸附树脂的静态吸附率和解析率,从而筛选出最佳树脂型号;同时以三七总皂苷为洗脱液含量测定指标,建立了醛-高氯酸比色法测定三七总皂苷含量的方法,通过测定三七总皂苷的洗脱率来优化分离条件,得出大孔吸附树脂初步分离人参皂苷Rg1的最佳工艺条件为:选用D-101型大孔树脂,上样浓度为30mg/mL,上样量为10mL,上样流速为0.5mL/min,洗脱剂为70%乙醇,洗脱剂用量为120mL,洗脱流速为1.0mL/min。3.采用离心薄层色谱法对人参皂苷Rg1粗品进行精制,利用TLC定性鉴别方法,收集纯度较高的管号进行合并,再通过二次分离,重结晶,得到纯度为91.3%的人参皂苷Rg1单体。通过比较固定相处方、洗脱剂种类、洗脱剂溶剂比例等色谱条件对分离效果的影响,得出最佳分离条件为:采用吸附剂层厚度为2mm的硅胶HF254-石膏作为固定相,CH2Cl2∶MeOH=7∶1作为洗脱剂,上样量为500mg,上样浓度为125mg/mL,洗脱剂流速为4mL/min。4.将分离得到的人参皂苷Rg1,采用薄膜分散-超声法制备脂质体,以包封率为指标,通过单因素实验和析因实验筛选出制备人参皂苷Rg1脂质体的最佳处方为:大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为3∶1,生理盐水为水相介质,脂质与人参皂苷Rg1的质量比为10∶1,人参皂苷Rg1在生理盐水中的浓度为2mg/mL。并建立了HPLC法测定人参皂苷Rg1脂质体含量的方法。通过测定,所制得的人参皂苷Rg1脂质体包封率为24.82%,载药量为2.482%。对制得的脂质体的血浆稳定性及储存过程中的渗漏率、长期稳定性、体外释放性能等进行了研究。分析了制备人参皂苷Rg1脂质体包封率低的原因,并尝试了改进制备工艺以求提高包封率。
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