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恶性肿瘤的基因治疗是新兴的研究领域，具有广阔的发展前景。以诱导细胞死亡作为肿瘤基因治疗的手段，必须解决诱导方法的特异、高效、持续、低毒副作用等问题。 granzyme B(粒酶B，GrB)是丝氨酸蛋白酶家族的成员，是CTL(细胞毒性T淋巴细胞)和NK(自然杀伤)细胞产生的主要杀伤性分子。GrB介导的死亡途径是多层次、多水平的，GrB基因可以作为杀伤肿瘤细胞的有力工具。 本文首先证实了活性型GrBa基因异位表达具有细胞致死效应。胞浆中过表达的GrBa蛋白通过自身的丝氨酸蛋白酶活性，切割细胞内重要的结构和功能蛋白，介导转染细胞死亡。形态异常的多核巨细胞是GrBa介导的死亡途径中特殊的现象，由细胞骨架和有丝分裂异常所致。 将针对肿瘤抗原HER-2的单链抗体基因与活性型GrBa基因用绿脓杆菌外毒素(PE)的转位肽序列相连接，形成Ab-PE Ⅱ-GrBa(immunoGrB)基因。表达的immunoGrB蛋白进入肿瘤靶细胞的内吞小体后，发生Arg279和Gly280之间肽键的定点裂解，裂解后的PE Ⅱ-GrBa被转位到细胞质中。本文比较了不同长度转位肽(PE253-364aa和253-358aa)的作用效果。一方面， 男 曰 旱 匡 大 学 忆 士 学 位 论 丈 从瞬时表达、可诱导表达和组成性表达三方面研究证明，N端部分PE 11序 列①E 280习64。和280上58 aa）的存在基本不影响GrBa诱导转染细胞死 亡的作用。其中N端融合有较短肽段（PE 280－358 aa）的重组GrBa蛋白具 有较强的蛋白酶活性和细胞生长抑制率，与单独活性型GrBa的作用程度接 近。另一方面，从瞬时转染和稳定转染角度研究证实，immunoGrB分子不具 有杀伤活性，它只有当特异性内化入HER－2阳性肿瘤细胞后才转变为活性形 式。初步的动物实验结果表明，immunoGrB分子具有体内抗HER－2阳性肿 瘤活性，能特异性杀伤HER－2阳性肿瘤细胞。 将immunoGrB基因稳定转染Jurkat细胞，观察到修饰的淋巴细胞能产 生和分泌inuntmoGrB分子，并且淋巴细胞能正常生长和建株。共培养实验 表明，分泌immunoGrB蛋白的淋巴细胞特异性杀伤HER－2阳性肿瘤细胞， 而对HER－2阴性的肿瘤细胞和正常细胞没有杀伤作用。含有较短转位序列 OE 11 253习58 aa）的 nununoGrB修饰的淋巴细胞杀伤作用最强，杀伤率可 达到70％以上。上述结果为基因修饰的自体淋巴细胞回输策略提供了体外实 验依据。 综上所述，用l’－－－－－－tinoGrB基因修饰的淋巴细胞杀伤HER－2阳性肿瘤， 可以特异性地在肿瘤细胞内部引发死亡。irnmunoGrB分子对肿瘤细胞的杀伤 作用具有特异性和高效性，并且分子本身对人体为低免疫原性，有利于长期 使用，这对于肿瘤的治疗具有重要的理论意义和实用价值。