检测人绒毛膜促性腺激素的表面增强拉曼散射及电化学阻抗免疫传感器的设计与应用

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人绒毛膜促性腺激素(hCG)是一种糖蛋白,分为α亚基和β亚基,β亚基能够显示出该激素水平的高低,称为β-hCG。β-hCG不仅是妊娠最重要的诊断标志物,同时也是一种肿瘤标志物。因此,能够快速检测β-hCG对妊娠安全及肿瘤早期筛查具有重要价值。免疫检测手段具有高灵敏性和高免疫分析特异性的特点,免疫传感器把传统的免疫检测与生物传感技术联合起来,有双方的优势,比如说分析时间下降、精度提高,而且又有利于自动化的实施等。因此,免疫传感器的设计与应用为检测β-hCG方法提供了新思路。本论文分别结合表面拉曼增强散射效应(SERS)及电化学阻抗技术,设计得到可用于SERS和电化学检测的免疫传感器,并尝试将传感器用于β-hCG检测的研究。主要研究内容包括以下几个部分:(1)用简单一步法构建了基于MXene/Ag复合纳米材料的SERS基底;其中探针分子是亚甲基蓝以及对巯基苯甲酸,以此来探究分析基底的SERS活性,而且筛选改良了相应的制取条件。在此基础上,利用磁性基底与外部磁场构建得到用于SERS检测的免疫传感器,所构建的免疫传感器检测β-hCG检测限为1.5 × 10-7 mIU mL-1。其中,在1583 cm-1处的拉曼信号强度与β-hCG浓度的对数在1.0 × 10-6~1.0 × 10-2 mIU mL-1浓度范围内线性相关(R=0.9952)。该免疫传感器用于人体血清内β-hCG的定量测定结果与罗氏电化学发光法测定对比相对误差值小于10%,特异性研究结果RSD小于4%。(2)利用MXene/Ag构建了具有信号放大作用的电化学阻抗型免疫传感器。通过在玻碳电极表面修饰MXene/Ag复合纳米材料固定抗体,记录β-hCG抗原与抗体间的特异性免疫反应后引起的电化学阻抗值变化,实现对β-hCG的快速测定。实验结果证明:该免疫传感器检测β-hCG检测限达到5.0 × 10-3 mIU mL-1,抗原浓度的对数处于1.0 × 10-2至1.0 × 102 mIU mL-1这一区间内有着较为优良的线性关系。上述免疫传感器构筑方法简单,灵敏度高,具有良好的重现性和稳定性,可实现对血清样品中β-hCG的快速检测。(3)基于3D打印技术设计电化学电解池,以导电玻璃作为工作电极构建便携式阻抗型免疫传感器测试技术。利用结合链霉亲和素的磁珠吸附生物素化的抗体,通过外加磁场将磁珠与抗体的复合物固定在一体化的免疫传感器上。在最佳条件下,交流阻抗的相对变化值与β-hCG抗原浓度的对数在1.0 × 10-1~1.0 × 103 mIU mL-1范围内线性相关(R=0.9988),检测限为5.0 × 10-2mIU mL-1。该阻抗型免疫型传感器以电化学原理为基础可以用于人体血清β-hCG的定量检测,该方法具有成本低廉、操作简便、可以便携化检测等优点。
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