论文部分内容阅读
在食品工业中,由于细菌生物被膜独特的微结构及耐药能力,对其防治和消除一直都是食品领域的一大难点。近些年来,一些研究提示天然产物可以有效的干扰细菌生物被膜的形成,并且避免了消毒剂的残留问题,为有效预防食品加工中生物被膜的形成和散播提供了良好的应用前景。目前尚未有关柠檬醛、肉桂醛和茶多酚对混合菌生物被膜形成影响的研究,对此进行研究有助于进一步了解天然产物对细菌生物被膜的调控机制及寻找有效防止食源性致病菌生物膜感染的手段都具有一定的科学意义和现实意义。本研究建立了食源性混合菌(金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌混合培养)生物被膜模型,研究了亚抑菌浓度下的柠檬醛、肉桂醛和茶多酚对混合生物被膜形成及群体感应信号分子AI-2的影响,以及经这三种天然产物处理后,混合生物被膜对常见消毒剂敏感度的变化。主要研究结果如下：1、采用微量肉汤稀释法测定柠檬醛、肉桂醛和茶多酚对金黄色葡萄球菌S. aureus20和肠炎沙门氏菌S. enteritidis07最小抑菌浓度,得出柠檬醛对两种菌MIC值均为0.8μg/ml,肉桂醛对两种菌的MIC值均为0.4μg/ml,茶多酚对S. aureus20的MIC是300μg/ml,对S. enteritidis07的MIC为600μg/ml。2、根据所得的最小抑菌浓度设计实验添加的天然产物浓度为1/8MIC、1/4MIC、1/2MIC、MIC,并通过微孔板法测定在不同浓度下柠檬醛、肉桂醛和茶多酚对混合菌生物被膜的黏附值,发现柠檬醛在亚抑菌浓度下可以抑制混合菌生物膜的形成(P<0.05)；肉桂醛在0.05μg/ml的浓度下不影响混合菌成膜(P<0.05),当浓度到达0.1μg/ml时开始抑制混合菌生物被膜形成(P<0.05)：茶多酚在75μg/ml,150μg/ml,300μg/ml能够明显抑制混合菌生物被膜的形成(P<0.05),且随着浓度的增大混合菌的黏附率逐渐降低,组间两两比较都有显著差异。3、通过扫描电镜及平板菌落计数法观察分析了柠檬醛、肉桂醛和茶多酚对混合菌生物被膜在不锈钢表面的菌群结构及分布影响,结果显示在添加三种天然产物后,生物膜结构变得稀疏,胞外物质减少,且不锈钢片上的活菌明显低于空白对照组,说明了这三种天然产物对生物被膜在不锈钢片上的形成具有良好的抑制效果。4、通过V.harveyi BB170生物发光实验,测定了柠檬醛、肉桂醛和茶多酚在亚抑菌浓度下对混合菌AI-2的活力影响,得出：柠檬醛在亚抑菌浓度下可以抑制AI-2的合成,而肉桂醛在亚抑菌浓度有促进混合菌AI-2合成的作用,低浓度下的茶多酚能诱导AI-2合成,当浓度达300μg/ml后可抑制AI-2的合成,差异都具有统计学意义(P<0.05)。5、采用微孔板法测定了在添加1/4MIC浓度的三种天然物质后混合菌生物膜对过氧化氢、次氯酸钠、过氧乙酸消毒剂敏感度的变化。研究结果显示：柠檬醛、肉桂醛和茶多酚可以有效增强混合菌生物被膜对此消毒剂的敏感性。其中混合生物膜菌对双氧水消毒剂的抵抗能力降低了2-10倍,对次氯酸钠的抵抗能力降低了约2-4倍,对过氧乙酸的抵抗能力降低了4-8倍。