小热休克蛋白(smal.Hea.Shoc.Protein，sHSP)是一种应激诱导的分子伴侣，分子量大约在12-4.kDa，有一个由80-100氨基酸组成α-晶体蛋白结构域。小热休克蛋白在生理和功能上和其他热休克蛋白有很大的相似性，此外，应激条件下可诱导此类蛋白。大多数小热休克蛋白在细胞受到刺激时能够形成大分子复合物，行使分子伴侣的作用。小热休克蛋白还跟一系列的生理过程比如，氧化还原反应的调节，细胞增殖和分化等有关。　　 本实验室克隆一条家蚕蛹期cDNA序列，发现此序列是一个已知的家蚕小热休克蛋白的基因，将其命名为BmHSP20.1。其包含一个53.bp的开放阅读框，编码一个由178个氨基酸组成的蛋白，预测分子量为20 kDa，等电点为5.460。我们将其插入到pET-28a(+)载体，构建重组质粒pET-28a-BmHSP20.1，并转化感受态细胞BL21(DE3)，用终浓度.m.IPTG诱导BmHSP20.1表达，超声破碎细胞后用SDS-PAGE分析，发现在2.kDa左右的位置有一条较浓的特异性蛋白条带，与预期一致。SDS-PAGE结果显示该蛋白部分以可溶形式存在于细胞裂解后的上清中，然后用镍亲和柱纯化目的蛋白，经FPLC反相柱层析进一步纯化后，再进行质谱分析，得到该融合蛋白的分子量为23.55.kDa，证实了该蛋白表达的正确性。用纯化的蛋白免疫一只雄性新西兰大白兔，制备多克隆抗血清，间接ELISA法测得抗体效价达1:64000以上。应用Wester.blotting法分析家蚕五龄幼虫的脂肪、精巢、皮、气管、马氏管、丝腺、肠、头八个组织，和卵、幼虫、蛹、蛾四个时期中BmHSP20.1的分布，我们在很多组织中检测到了明显的条带，而在皮的信号很弱。我们还利用Real-tim.PCR的方法，对家蚕卵、五龄幼虫、蛹、蛾等发育时期，以及五龄幼虫各组织中的靶mRNA的量进行比较。然而，通过热激5龄幼虫后部丝腺，Wester.blotting分析表达有显著增加。最后，我们用间接免疫荧光技术对家蚕卵巢细胞Bm5研究了BmHSP20.1在正常和受激细胞中的亚细胞定位情况，发现在正常情况下，BmHSP20.1主要存在于在细胞核中，还有一部分存在胞质；而当细胞在39℃热激2 h后，BmHSP20.1则主要存在于质膜和核膜上；在热激后恢复2 h后，该蛋白的定位情况又和正常情况下相同。这些结果为细胞抵抗环境压力(比如热刺激)的保护机制提供了很好的解释。