【摘 要】
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目的:将人RhoC基因正、反义真核表达载体分别转染胆管癌QBC939细胞株,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭的影响。方法:利用真核表达质粒载体pcDNA 3.1/Hyg(+)构建
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目的:将人RhoC基因正、反义真核表达载体分别转染胆管癌QBC939细胞株,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭的影响。方法:利用真核表达质粒载体pcDNA 3.1/Hyg(+)构建的包含RhoC正、反义基因全长序列的重组表达质粒载体,以阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM 2000转染胆管癌QBC939细胞株,挑选潮霉素抗性克隆,RT-PCR检测潮霉素抗性片段在转染细胞中的表达,同时以空质粒pcDNA 3.1/Hyg(+)转染组作为对照,通过细胞克隆形成实验、流式细胞仪检测细胞周期以及体外Matrigel侵袭实验研究重组质粒转染对胆管癌QBC939细胞株增殖与侵袭能力的影响。结果:RT-PCR显示转染细胞中潮霉素抗性基因片段有表达,转染成功,与QBC939细胞及空载体(QBC939-V)对照细胞相比,克隆形成实验中正义RhoC cDNA转染细胞(QBC939-S)克隆形成数目明显增加,反义RhoC cDNA转染细胞(QBC939-AS)克隆形成数目明显减少,存在显著性差异(P<0.05);流式细胞仪分析结果显示转染后QBC939-AS细胞出现G1期阻滞,而QBC939-S细胞G1期细胞百分数增多,结果存在显著性差异(P<0.05);体外侵袭实验显示QBC939-S细胞体外侵袭能力明显增强,而QBC939-AS细胞体外侵袭能力明显降低,结果均存在显著性差异(P<0.05)。结论:正义RhoC基因促进胆管癌QBC939细胞的增殖和侵袭能力,反义RhoC基因抑制胆管癌QBC939细胞的增殖和侵袭能力。
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