油桐桐酸合成酶基因(fadx)的克隆、反义表达载体的构建及对烟草的初步转化

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:shmily2
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随着全球性化石资源日益枯竭,加快发展以生物柴油为代表的可再生能源势在必行。以油桐的种子榨出的桐油作为原料生产生物柴油具有明显的优势,但美中不足是其主要成分α-桐酸(18:3△<9cis,11trans,13trans>)含量过高,这不符合优质生物柴油原料多不饱和脂肪酸含量尽量低的要求。α-桐酸合成酶是控制亚油酸向α-桐酸转化的关键酶,本研究通过反义表达来抑制α-桐酸的合成,从而获得符合生产优质生物柴油标准的脂肪酸原料。方法是以生长中的油桐种子为材料,利用改良TRIzoL法提取总RNA,并根据GenBank中已经登录的α-桐酸合成酶基因fadx的序列,设计特异性引物,采用RT-PCR方法,得到fadx基因全长cDNA,克隆到pMD18-T-simple载体中测序并进行了生物信息学分析。将所得基因经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121,构建反义表达载体pBI121fadx,利用农杆菌介导法转入烟草叶片。
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