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本研究建立了诊断猪乙型脑炎病毒的试验方法—反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）。从GenBank中查出收录的31株猪乙型脑炎病毒E基因的已知序列,用DNASTAR软件对这31株猪乙型脑炎病毒E基因进行同源性分析,以确定扩增的靶序列。以这段靶区域为模板,利用Primer5软件设计合成了一对引物,建立了反转录-聚合酶链式反应检测乙脑病毒的方法。 扩增出的RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析,可见362bp的特异性条带。将扩增产物酶切,电泳结果显示扩增产物被切成两条特异性条带。 用建立的RT-PCR技术进行特异性试验,对4株河北地区乙型脑炎病毒分离株进行检测,结果该引物对4株乙脑病毒均能扩增出与预期大小相符的RT-PCR产物。对猪伪狂犬病病毒闽A株（PRV）;猪细小病毒（PPV7909）;猪瘟病毒石门强毒株（HCV）;猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）及正常鼠脑对照进行扩增;结果均为阴性。敏感性试验结果表明,该法可检出稀释至256倍的鼠脑毒,相当于14个TCID50。以上结果表明该法与其他检测JEV抗原的方法相比,具有高度的特异性和灵敏性,可从分子水平上对JEV进行快速诊断。 为使鉴别诊断方法易于在临床上推广,大众化,易操作,直观,本研究还建立了SPA协同凝集试验来诊断乙脑。用富含A蛋白的金黄色葡萄球菌国际标准株（Cowan Ⅰ）标记了抗乙脑病毒的高免血清,建立了诊断猪乙型脑炎的SPA平板协同凝集试验。经特异性试验,敏感性试验,对比性试验,保存期测定及临床检测表明,该方法具有敏感性高,特异性强,重复性好等优点,且操作方法简便,快速,节省材料,无需特殊仪器,适用于基层猪场对流行性乙型脑炎的快速诊断和流行病学调查。 本研究还摸索了一种从SDS-聚丙烯酰胺凝胶中回收纯化乙型脑炎病毒单一蛋白抗原成分的方法。将鸡胚毒进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,以确定要回收蛋白的分子量,电洗脱回收目的蛋白,将回收的蛋白免疫豚鼠,琼扩检测豚鼠血清效价,SPA协同凝集试验检测豚鼠血清为阳性,试验结果表明,用这种方法纯化的抗原能够诱导出良好的抗体反应,为制备特异性抗体奠定了基础。