降解PLA菌株的选育及相关研究

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聚乳酸(PLA)是生物高分子材料中具有广泛用途的代表,由于其具有等同于石油化工高分子的物性而又能被生物降解,不会引起环境污染,目前引起人们广泛的关注。在医学、生态学、纺织业和人类的日常生活中,PLA正发挥着越来越重要的作用。PLA具有高于160℃的熔点,透明度高,具有高强度和抗拉伸能力,目前正在取代石油化工塑料而成为新一代的环保生物塑料。本论文重点在于证明微生物降解PLA的可行性。筛选出一株具有降解PLA能力的菌株,通过紫外诱变获得一株能高效降解PLA的突变株,分离、纯化出PLA解聚酶,并对其进行了初步的酶学性质的研究。主要结果如下:1.由抚顺石油三厂排出的污泥中筛选出可降解PLA的一株细菌,经初步鉴定属固氮细菌属(Azotobacter sp.),编号为DS2004。以DS2004为出发菌株,通过紫外线诱变,采用摇瓶培养测定发酵液酶活力的复筛方法,获得具有遗传稳定性的PLA降解菌株,编号为DS2004-a,测得该菌株的酶活高于原始出发菌株的16.51%。2.对DS2004-a菌株产生的PLA解聚酶进行了分离、纯化,并对其解聚酶的特性进行了探讨。纯化倍数约为14.67,酶活力回收率10.47%,酶蛋白的相对分子质量约为45.2kD。3.该酶最适反应温度和pH分别为40℃和8.6。在温度35℃以下和pH8.0~9.2范围内稳定。金属离子Ca2+对PLA解聚酶有激活作用,而Cu2+、Hg2+、Zn2+等金属离子对此酶有抑制作用。质谱仪测得酶降解PLA的产物中含有乳酸。4.进行PLA膜的降解,降解时间为7d,得到的PLA膜表面由透明变成白色,表面积较未降解时增大,表面未看出形态改变,但强度明显降低。经扫描电镜观察到试样表面部分地方开始变化,有絮状物富集于试样表面,可能的原因是聚乳酸开始降解,分子量降低,被溶胀的程度加大,但还没有降解到小分子而脱离样品,当放大倍数增加时表现得更加明显。
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