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第一部分豚鼠内淋巴囊经颅快速取材方法的研究目的:通过建立豚鼠内淋巴囊快速取材方法,为了解其对内耳功能的影响提供活性良好的组织材料。方法:将健康成年豚鼠在显微镜下经颅内进行活组织解剖,并用摄像系统记录解剖过程及结果,组织学验证结果。结果:在豚鼠颅骨标本上准确定位内淋巴囊位置,并在显微镜下成功解剖出豚鼠内淋巴囊,组织学证实解剖位置为内淋巴囊。结论:经颅内解剖豚鼠内淋巴囊是简单易行、准确可靠的快速取材方法。第二部分小鼠内淋巴囊和血管纹发育形态对比及发育过程中两者Na~+-K~+-ATP酶表达的实验研究目的:探究昆明小鼠胚胎发育过程中内淋巴囊和血管纹形态变化以及在胚胎过程中两者Na~+-K~+-ATP酶表达情况。方法:A、动物培育:选用耳廓反射灵敏的昆明小鼠以雌:雄=2:1的比例合笼来获取E12-E2,P1-P3时期标本;B、E12-E20、P1-P3各时期小鼠胚胎颅骨标本常规石蜡切片及HE染色,在显微镜下连续观察各时期发育情况;C、E12-E20各时期小鼠胚胎内淋巴囊及血管纹标本进行Na~+-K~+-ATP酶免疫组织化学染色。结果:A、获得所需各时期胚胎标本。B、E13:内淋巴管尖端扩张形成内淋巴囊始基;E14:内淋巴囊始基发育成囊状结构,此时期耳蜗蜗壳始基形成;E15:耳蜗管底转外侧壁形成血管纹始基;E17:内淋巴囊上皮细胞及血管纹始基细胞逐渐增多、增厚;E18:内淋巴囊上皮开始出现乳头状结构;E19-E20:内淋巴囊乳头逐渐增多,耳蜗管从中转到顶转开始形成始基;P1-P3:耳蜗血管纹从底转到顶转逐渐发育成三层细胞结构。C、E13:内淋巴囊上皮开始有Na~+-K~+-ATP酶弱表达,E14-E20:Na~+-K~+-ATP酶表达逐渐增加;而在同时期的蜗管均无Na~+-K~+-ATP酶的表达。结论:内淋巴囊是从前庭向后外方向延伸而形成,血管纹是从耳蜗管外侧壁演变而来;内淋巴囊发育成熟在形态学上较血管纹早,血管纹是从耳蜗底转向顶转逐渐发育成熟,整个耳蜗管只发育成成熟耳蜗的中阶;内淋巴囊胚胎期就有Na~+-K~+-ATP酶表达,推测胚胎期在内淋巴环境中就可能存在高钾环境,这可能在胚胎期毛细胞极性发育起着重要的作用;早期研究提示E18开始内淋巴囊才有大量的AQP2表达,结合本实验结果推测在从E18开始内淋巴囊上皮开始有吸收内淋巴的功能。第三部分小鼠发育过程中耳蜗间质干细胞的实验研究目的:在小鼠内耳发育过程中,在耳蜗管周围存在大量的间质细胞,本实验主要是探究这些细胞是否为干细胞。材料和方法:通过耳廓反射正常健康的成年雌雄昆明鼠获得各时期胚胎,对各个时期进行冰冻切片及对E16耳蜗进行细胞培养,并用特异性干细胞抗体抗cadherin和抗SSEA4进行免疫组化染色。结果:耳蜗壳在E14成熟,E15抗cadherin和抗SSEA4在除耳蜗管细胞及耳蜗螺旋神经细胞样细胞以外的间质中有表达,从E16开始,耳蜗管底转周围间质细胞两种细胞的染色明显减弱,有的甚至消失,E16耳蜗培养细胞也存在cadherin和抗SSEA4的表达。结论:在耳蜗发育过程中,耳蜗管周围的间质细胞为干细胞,并且干细胞特性从E16开始逐渐消失。