论文部分内容阅读
Toll样受体（Toll like receptors, TLRs）是天然免疫应答和获得性免疫应答的重要模式识别受体。TLR3可识别括病毒的dsRNA结构。抗病毒中药的应用历史久远，近年来已经为众多研究所证实。本研究拟从候选抗病毒中药中筛选出对TLR3有激动作用的药物，并为抗病毒TLR3激动剂的进一步研究奠定基础。本实验首先对15种候选中药标准品：淫羊藿苷、鬼臼毒素、山奈酚、绿原酸、齐墩果酸、大黄素、槲皮素、连翘酯苷、M1024、大黄酚、靛玉红、靛蓝、M1025、原花青素、荆芥油，采用CCK-8试剂盒检测细胞毒性，将200μg/mL、40μg/mL、8μg/mL、1.6μg/mL、0.32μg/mL、0.064μg/mL的候选药物标准品分别与NIH/3T3细胞和MRC-5细胞作用后24h、48h、72h时，分析上述药物对两种细胞的毒性情况。将候选中药标准品按照其基本无毒浓度与NIH/3T3细胞和MRC-5细胞作用，流式细胞术检测候选中药标准品对TLR3表达的影响。结果显示，M1024可显著增强NIH/3T3细胞内TLR3的荧光强度，表明TLR3表达上调；M1025对NIH/3T3细胞和MRC-5细胞内的TLR3荧光强度均可显著增强，说明两种细胞经M1025处理后，TLR3表达均上调。根据以上实验初步筛选出分别对NIH/3T3细胞和MRC-5细胞内TLR3有激动作用的药物。在此基础上，通过ELISA实验检测了激动药物分别作用后对NIH/3T3细胞和MRC-5细胞IFN-α和IFN-β的表达的影响。ELISA结果显示，M1024和M1025与NIH/3T3细胞作用后，IFN-β表达增加，IFN-α没有显著变化；同时，M1025作用后MRC-5细胞的IFN-α和IFN-β的分泌也未见显著变化。实时荧光定量PCR检测激动药物作用后NIH/3T3细胞和MRC-5细胞中TLR3、IFN-α、IFN-β和IRF3基因的相对表达量。结果显M1024和M1025与NIH/3T3细胞作用后，TLR3、IFN-β基因表达上调，IFN-α、IRF-3基因无显著差异；M1025与MRC-5细胞作用后，TLR3基因表达上调，FN-α、IFN-β和IRF3基因无显著差异。