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目的: 从外周血中分离培养DC和CIK,制备DC与结肠癌SW480融合细胞,观察融合细胞刺激的CIK体外杀伤结肠癌SW480细胞的效果。 方法: 1.从健康成年人外周血中分离出单个核细胞(PBMC),然后用细胞因子诱导培养树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并用流式细胞仪进行表面标志分子鉴定。 2.用聚乙二醇(PEG)诱导DC与结肠癌SW480融合,经HAT/HA选择培养基筛选培养出DC-SW480融合细胞,观察DC-SW480融合细胞形态。 3.融合细胞刺激的CIK体外杀伤结肠癌SW480的实验分组: 1)DC-SW480融合瘤苗与CIK细胞共培养组, 2)DC和SW480的混合细胞(DC∶SW480=1∶5)与CIK细胞共培养组, 3)DC与CIK细胞共培养组, 4)单纯CIK细胞对照组, 共培养72小时后,用ELISA法测定各组细胞培养上清液中IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平。 4.CIK杀伤结肠癌细胞SW480效果的观察:用(Cell Counting Kit-8)CCK-8检测通过不同方法活化的CIK细胞对结肠癌细胞的杀伤效果。 结果: 1.DC细胞培养第7d树突状突起明显,流式细胞仪检测成熟DC表面分子,CD80为75.23%、CD83为61.25%、HLA-DR为89.69%,表明DC已成熟。 2.CIK细胞培养第7d,CD3+CD56+细胞为比例是25.21%,第14d,CD3+CD56+细胞比例为57.33%,表明CIK细胞已成熟。 3.DC-SW480融合细胞胞质融合但是各自的细胞核没有融合,经过HAT/HA选择培养基培养后可以得到DC-SW480融合细胞。 4.各组效应细胞刺激CIK细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的量DC-SW480融合细胞组分别为(24.40±0.01)ng/ml、(195.24±14.30)ng/ml、(594.73±7.73)pg/ml,DC和SW480的混合细胞组分别为(20.44±0.57)ng/ml、(164.50±0.50)ng/ml、(549.16±8.52)pg/ml,DC细胞组分别为(20.18±0.16)ng/ml、(165.00±2.34)ng/ml、(511.95±22.84)pg/ml,单纯CIK细胞组分别为(19.45±0.08)ng/ml、(165.99±0.96)ng/ml、(501.88±15.68)pg/ml,DC-SW480融合细胞组与其他三组比较相比较P<0.05,差异有统计学意义。 5.DC-SW480融合细胞组对结肠癌SW480细胞的杀伤率为(65.99±2.42)%与DC和结肠癌SW480细胞混合细胞组杀伤率(48.27±7.56)%,DC细胞组的杀伤率(43.48±2.42)%,单纯的CIK细胞组的杀伤率(24.01±4.90)%相比较P<0.05,差异有统计学意义。 结论: 1.DC-SW480融合瘤苗可以增强CIK细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平。 2.DC-SW480融合瘤苗可以明显增强CIK杀伤结肠癌SW480细胞的能力。