一株Cobetia sp.引起的坛紫菜绿烂病病原菌的鉴定及全基因组测序

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坛紫菜(Pyropia haitanensis)是中国独有的紫菜品种,在沿海的潮间带区域生活,具有独有的适应环境胁迫体系。近年来,紫菜养殖业的栽培规模持续增长,紫菜已成为重要的经济藻类,同时也遭受着各种各样的病害威胁。本文对引起坛紫菜绿烂病的一株贝特氏菌(Cobetia sp.) X1进行了分离鉴定和致病性研究,将X1鉴定为新种—紫菜贝特氏菌Cobetia pyropiae sp.nov.,并进行了X1的全基因组测序,为紫菜病害流行病学及疾病防治提供了基础数据。1.紫菜绿烂病病原分离鉴定和致病性研究:从福建省莆田养殖海区患绿烂病坛紫菜叶状体分离得到一株优势细菌X 1,人工回接感染实验和组织病理检测显示该菌株能感染坛紫菜,引起绿烂病。X1为革兰氏阴性菌,大小为0.9-1.5μm ×0.4μm,根据16SrRNA基因序列分析结果将X1鉴定为贝特氏菌(Cobetia sp.)。以浓度为104~108cfu/ml 的X1菌悬液感染坛紫菜,在7天内引起紫菜出现13.8%-100%的病斑面积,感染浓度越高,病程的发展越快。2.紫菜贝特氏菌X1的鉴定:X1能在温度4℃-37。C、盐度5-20%、pH 6-10范围内生长,最适生长温度为32℃、最适生长盐度为10%、最适pH为7.5-8.5;X1在明胶酶、淀粉酶、酪蛋白酶、fween 40、Tween 80反应为阴性,Tween20阳性;对18种常见抗生素敏感。在脂酶、α-葡萄糖苷酶、α-半乳糖苷酶、p-半乳糖苷酶的反应呈阳性:主要脂肪酸含量为:C16:1 w7c/16:1w6c(32.92%), C16:0 (19.18%), C12:03-OH (16.04%), C18:1 w7c/18:1 w6c(9.83%), C12:0(8.18%), C17:0 cyclo(7.86%)。上述特征与贝特氏菌属的其他细菌有较明显的不同。在16SrRNA上X1与C. marina较接近,生理生化特征上有较多的差异,且两者DNA杂交结果为33.78%,因此X1可鉴定为新种,定名为紫菜贝特氏菌Cobetia pyropiae sp. nov.3.紫菜贝特氏菌X1的全基因组测序:本研究利用三代测序平台进行了X1菌株的全基因组序列测定。得到一个完整的环形基因组图,基因组大小为3.88M,C+G含量为62.35%,注释的CDS个数为3,431,平均长度为986 bp,含有7个16s-23s-5s rRNA和72个tRNA,进行了COG、KEGG和VFDB分析,结果表明注释的大部分基因与细菌的代谢途径过程相关,包括糖脂转运与代谢、氨基酸转运与代谢、核酸和酶的转运与代谢等;8%的基因为毒力相关因子,包括鞭毛、菌毛、胞外多糖、转运系统和分泌系统等。
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