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目的:蕲蛇为蝰科动物五步蛇Agkistrodon acutus(Güenther)的干燥体,蕲蛇性温,味甘、咸,具有祛风,通络,止痉的功能。主治风湿顽痹,麻木拘挛,中风,口眼?斜,半身不遂,抽搐痉挛,破伤风,麻风,疥癣。蕲蛇为贵重药,市场上常见掺伪造假、以次充好的现象,中国药典标准仅从性状、浸出物等方面进行质量控制,并以聚合酶链式反应法进行真伪鉴定,较难准确评价蕲蛇药材及饮片的真伪优劣。本论文拟在蕲蛇真伪鉴别的基础上,完善蕲蛇药材和饮片的质量标准,为蕲蛇药材和饮片的质量评价提供科学依据。方法:1真伪鉴别本研究对42批蕲蛇药材的性状相关指标进行描述,并测定其长度、腹部撑开最大直径,体重等相关指标;利用电子显微镜对蕲蛇粉末特征进行阐述;在不同的色谱条件下对蕲蛇及其混伪品进行了薄层色谱鉴别。根据2015版《中国药典》一部蕲蛇项下聚合酶链式反应法,对蕲蛇及其常见伪品的DNA进行鉴别。2 HPLC指纹图谱研究采用HPLC法对10批蕲蛇药材和18批饮片的水提物进行测定,以甲醇(B)-0.1%甲酸(A)为流动相,DAD检测器,检测波长为254 nm,并利用“中药指纹图谱相似度评价系统2004版”对共有峰进行相似度分析。3成分定量分析采用HPLC法对11批蕲蛇药材及其炮制品(蕲蛇、酒蕲蛇、蕲蛇肉)进行核苷类和氨基酸成分的测定,比较炮制前后含量的变化,为炮制工艺规范化提供科学依据。4蕲蛇药材等级标准和蕲蛇饮片的质量标准研究本研究对42批蕲蛇药材进行了等级研究,对47批蕲蛇饮片(蕲蛇19批、酒蕲蛇16批、蕲蛇肉12批)进行质量标准研究。在对蕲蛇药材的等级研究中,本研究将蕲蛇药材的性状、醇溶性浸出物、核苷含量作为等级划分的指标;在对蕲蛇饮片质量标准的研究中,以各饮片的性状、水分、灰分、醇溶性浸出物为指标。结果:1鉴别研究蕲蛇药材性状鉴别依据主要有翘鼻头、管状毒牙、方胜纹、连珠斑、刀片状凸起、佛指甲等。蕲蛇粉末的显微鉴别特点主要有角质鳞片呈乳头状突起,覆瓦状排列;背部鳞斑呈棕色或白色;可见横纹肌纤维、骨碎片、脂肪油滴。薄层色谱鉴别法能将蕲蛇与6种混伪品区分开来,分别是百步蛇Daboia russelii siamensis、金钱白花蛇Bungarus multicinctus、闪鳞蛇Xenopeltis unicolor、眼镜蛇Naja naja、乌梢蛇Zaocys dhumnades。分子鉴别研究表明,蕲蛇药材和饮片在300~400 bp均有单一性条带。2蕲蛇药材及饮片HPLC指纹图谱研究以水为提取溶剂制备供试品溶液,采用高效液相色谱法(HPLC),标定了9个共有峰,评价结果显示蕲蛇药材和蕲蛇饮片有较好的相似性,相似度均在0.926以上,共有峰面积均占总峰面积的90%以上,具有鉴别意义。并对主要色谱峰进行了归属,其中3号峰为尿嘧啶,6号峰为次黄嘌呤,7号峰为黄嘌呤,8号峰为肌苷,9号峰为鸟苷。3成分研究蕲蛇核苷类成分主要有4种,分别是尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、肌苷,蕲蛇与其炮制后的3种饮片中,4种核苷成分的总含量分别为蕲蛇药材2.963 mg/g、蕲蛇2.971 mg/g、酒蕲蛇2.834 mg/g、蕲蛇肉3.370 mg/g,表明炮制后饮片蕲蛇和蕲蛇肉核苷类成分有所提高,而酒蕲蛇则有所减低。5批蕲蛇药材中,17种水解氨基酸总含量的均值和必需氨基酸总含量的均值分别是蕲蛇药材469.79mg/g和179.80 mg/g,而饮片蕲蛇为570.02 mg/g和216.07 mg/g,酒蕲蛇625.72mg/g和221.28 mg/g、蕲蛇肉871.94 mg/g和330.59 mg/g。与蕲蛇药材相比,蕲蛇3种饮片的17种氨基酸总含量和必需氨基酸总量的变化均有显著性差异,炮制后,3种饮片的17种氨基酸总含量和必需氨基酸总含量均有所提高。4蕲蛇药材等级标准和蕲蛇饮片质量标准研究根据性状、腹部撑开最大宽度、醇溶性浸出物、核苷类成分含量5项指标测定值的范围将蕲蛇划分为一等、二等及不合格品,结果表明,一等占比38.1%,二等占比57.1%,不合格占比4.8%。蕲蛇饮片的质量标准研究对蕲蛇饮片性状、鉴别作了规定,并对水分、灰分、醇溶性浸出物这3个指标的测定值进行了规定。结论:蕲蛇的鉴别研究对于蕲蛇真伪优劣的判断有重要意义,性状、显微研究可对蕲蛇药材等级的划分提供参考。本研究建立的指纹图谱方法重现性好,稳定性高,为评价蕲蛇药材和饮片的内在质量提供了参考依据。核苷类及氨基酸成分的研究,为探究蕲蛇有效成分、评价蕲蛇药材和饮片的内在质量提供了数据支持。蕲蛇炮制前后成分的变化,为完善炮制工艺提供了科学依据,为阐明炮制后药效的变化提供了数据支持。本研究首次建立了蕲蛇药材的等级划分标准,并建立了蕲蛇3种饮片的质量标准研究,对规范蕲蛇药材与饮片的生产具有较好的参考意义。