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研究背景和目的:肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(TNFAIP8)是近年肿瘤研究中发现的一种新蛋白,隶属TNFAIP8家族,在多种肿瘤组织中过表达,可能参与肿瘤发生及细胞存活/死亡过程。TNFAIP8在免疫器官/细胞,如脾脏、胸腺及T细胞中表达,但其是否参与特定T亚群——CD4+CD25+调节性T细胞的功能调节,继而影响脓毒症疾病进程,迄今尚不清楚。本研究旨在探讨TNFAIP8在CD4+CD25+Treg中的表达及功能,并分析其可能的调节机制。实验方法:分离正常小鼠脾脏CD4+CD25+Treg,利用蛋白印迹及逆转录-聚合酶链式反应技术检测TNFAIP8在Treg中的表达水平。体外实验以TNFAIP8干扰/过表达慢病毒转染Treg,利用LPS刺激模拟脓毒症环境;体内实验时,小鼠尾静脉注射干扰/过表达慢病毒后饲育2周,进行CLP建模。Treg细胞标志性分子CTLA-4和Foxp3的表达采用流式细胞术检测;CCK-8法检测Treg对T细胞的增殖抑制效应;Annexin V法检测Treg凋亡率;Treg细胞转化生长因子(TGF)-β、白介素(IL)-10,Treg/T细胞共培养体系细胞因子水平,T细胞中活化蛋白1(AP-1)及活化T细胞核因子(NF-AT)等均采用ELISA法检测。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路活化水平亦采用蛋白印迹法检测。统计学方法:定量数据以x±s标示并录入SPSS23.0分析,采用单因素方差分析(one-way ANOVA)比较多 组总体差异,组间比较采用 LSD-t 检验,P<0.05 时存在统计学显著性差异。研究结果与结论:1.Treg中存在TNFAIP8蛋白和基因水平表达。2.体外实验中,与正常脾脏Treg相比较,转染TNFAIP8-siRNA干扰慢病毒Treg细胞CTLA-4、Foxp3表达显著降低,IL-10、TGF-β分泌量明显减少;Treg凋亡率显著增高,其对T细胞的增殖抑制效应也明显减弱,T细胞IL-2分泌量明显增加,AP-1和NF-AT活性显著增强,Th细胞向Th 1方向极化。而转染TNFAIP8-RNA过表达慢病毒Treg细胞CTLA-4、Foxp3表达显著上调,IL-10、TGF-β分泌量明显增加;而Treg凋亡率显著下降,其对T细胞增殖抑制也明显增强,T细胞IL-2分泌量明显减少,AP-1和NF-AT活性显著减低,Th细胞向Th2方向极化。3.体内实验中,与野生型CLP小鼠相比,TNFAIP8-siRNA-CLP 小鼠脾脏 Treg 中 CTLA-4、Foxp3 表达及 IL-10、TGF-β分泌均明显减低,细胞凋亡率升高,其对T细胞增殖抑制也明显减弱,T细胞IL-2分泌和AP-1、NF-AT活性提高,Th细胞向Th1方向分化;而TNFAIP8-RNA-CLP小鼠Treg相应指标也表现出与体外实验相似的变化趋势。4.与正常Treg相比,转染TNFAIP8-siRNA/TNFAIP8-RNA的Treg中p-JNK表达明显升高/减低,p-ERK及p-p38表达各组间无显著差异。综上,TNFAIP8可能通过JNK信号通路影响脓毒症小鼠Treg细胞的免疫抑制效应。