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目的探讨氟的细胞损伤作用及硒(Se)、维生素E(VE)的干预效果。方法1.氟的细胞损伤作用研究(1)动物实验：选取SPF纯种昆明小鼠,随机分为：低、中、高氟组32mg/kg.d)和对照组(相应体积生理盐水),连续14天。末次注射后24h内用梯度离心方法分离小鼠骨髓细胞作微核率检测；分离肝细胞核、线粒体、微粒体三种亚细胞结构并制作玻片,用傅里叶红外光谱仪对各片进行扫描检测,比较各组之间的差异。(2)体外细胞培养实验：抽取正常人外周静脉血,用Ficoll密度梯度离心法提取淋巴细胞培养48h后,分组及处理：淋巴细胞分组为F1、F2、F3、F4和对照组,分别加入氟化钠使终浓度为0.01mg/L0.04mg/L、0.16mg/L、0.64mg/L,对照组加等容培养液,加氟培养4h后收集细胞,分别检测各孔淋巴细胞存活率(MTT法)、DNA损伤(单细胞凝胶电泳试验SCGE)、凋亡率(Annexin V-FITC/PI法)、端粒酶含量(酶联免疫法)。2.Se、Se+VE对氟致细胞损伤作用的干预效果实验研究抽取正常人外周静脉血,用Ficoll密度梯度离心法提取淋巴细胞培养48h后,分组及处理：0.64mg/ml氟组(F4)(下同)、Se10.005mg/L Se20.05mg/L、Se30.5mg/L干预组(Sel+F4、Se2+F4、Se3+F4(下同))、Se1+VE50umol/L、Se2+VE50umol/L、Se3+VE50umol/L干预组(Se1+VE+F4、Se2+VE+F4、Se3+VE+F4)(下同)。体外常规培养4h后收集细胞,分别检测各孔淋巴细胞的存活率(MTT法)、凋亡率(Annexin V-FITC/PI法)、DNA损伤(单细胞凝胶电泳试验SCGE)、端粒酶含量(酶联免疫法)。结果1.氟的细胞损伤作用研究(1)动物实验与对照组相比,中氟和高氟组小鼠骨髓细胞微核率升高有统计意义(P<0.01)。红外光谱分析(ATR-FTIR)显示：染氟使实验小鼠肝细胞核、线粒体、微粒体的化学成分发生改变,这些改变与细胞遗传功能、微粒体代谢酶活力、线粒体代谢酶活力密切相关。(2)体外细胞培养实验与对照组相比,各染氟组淋巴细胞活性均降低,F3、F4组细胞活性降低有统计学意义(P<0.05)；各染氟组与对照组相比,细胞凋亡率随着氟浓度的增加而逐渐升高,F2、F3、F4组细胞凋亡率升高有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。氟对DNA损伤的影响：表3-3显示,经氟作用4h后,与对照组相比,F1、F2、F3、F4组的彗星细胞率均升高,经卡方检验,差异均有统计学意义(P<0.01)。而实验组的细胞彗星尾长(Tail Length)、尾部DNA%、尾距(TailMoment)、Olive尾距(Olive Tail Moment)均大于对照组,其中0.04～0.64mg/mL (F2、F3、F4)氟组与对照组比较,差异均有统计学意义。氟对端粒酶含量的影响：加氟培养4h后,染氟组淋巴细胞端粒酶含量逐渐升高,其中F3组端粒酶含量与对照相比,差异有统计学意义(P<0.05),F4组端粒酶含量明显高于其他各组。2.Se、Se+VE对氟致细胞损伤的干预效果研究2.1Se、Se+VE对氟致淋巴细胞活性下降的干预效果：Se1+F4、Se2+F4、Se3+F4干预组与F4组相比,淋巴细胞活性有所升高,且随着Se的浓度增加而逐渐升高,Se2+F4、Se3+F4干预组细胞活性升高有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。Se+VE干预组中,只有Se3+VE+F4组细胞活性明显高于F4组(P<0.01)。Se+VE各干预组与对应的Se单独干预组相比,细胞活性差异无统计学意义(P>0.05)。2.2Se、Se+VE对氟致淋巴细胞凋亡率升高的干预效果：与F4组比较,Se1+F4、Se2+F4、Se3+F4、Se1+VE+F4、Se2+VE+F、Se3+VE+F4干预组细胞凋亡率均有下降趋势,除了Se2+VE+F4组外,其他干预组凋亡率下降均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；Se干预组与相应的Se+VE干预组相比,组间差异无统计学意义(P>0.05)。2.3Se、Se+VE对氟损伤淋巴细胞DNA的干预效果：Se、Se+VE干预组与F4比较,细胞彗星尾长(Tail Length)、尾部DNA%、尾距(Tail Moment)、Olive尾距(Olive Tail Moment)均降低,差异均有统计学意义(P<0.05,或P<0.01)；Se干预组与相应的Se+VE干预组相比,组间差异无统计学意义(P>0.05)。2.4Se、Se+VE对氟致淋巴细胞端粒酶含量升高的干预效果：Se、Se+VE干预组与F4比较,端粒酶含量随Se浓度的升高而降低,各组端粒酶含量差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；Se干预组与相应的Se+VE干预组相比,组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.染氟可致小鼠骨髓细胞微核率升高；2.染氟使肝细胞核、线粒体、微粒体的化学成分发生改变,这些改变与细胞遗传功能、微粒体和线粒体代谢酶活力密切相关；3.氟对体外培养淋巴细胞也具有明显的遗传损伤效应,可致细胞凋亡率升高、DNA损伤增加、端粒酶含量升高,这些改变可能与肿瘤发生有关；4.在本实验剂量范围内,Se、Se+VE对氟致淋巴细胞损伤有明显的干预作用；5. ATR-FTIR可敏感地检测氟引起RNA、DNA、蛋白质等物质的化学结构改变,可望作为早期遗传损伤监测的方法之一。