杨树高频再生体系的建立及耐盐碱基因转化的研究

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本研究以毛白杨系品种:二倍体雌、雄株及三倍体雌、雄株和美洲黑杨的芽及叶片为外植体材料,系统的研究了杨树组织培养的影响因素,建立了五种杨树的高频再生体系;并采用农杆菌介导的基因转化法,将耐盐碱基因(OsNHX1)导入美洲黑杨基因组中,经PCR分子鉴定,表明已获得了OsNHX1基因的转化植株。具体工作如下:1. 杨树组织培养和高频再生体系的建立选用五种杨树芽、叶片进行组织培养,诱导再生,得到了白杨系外植体最适分化培养基为:MS+BA1.0(mg·L-1,单位下同)+NAA0.1+GA0.5,分化率可以达到90%以上;美洲黑杨再生培养基为:MS+BA0.5+NAA0.1+GA0.5,分化率可以达到99%以上;生根培养基:MS+NAA0.1。2. 种间基因型的差异是影响植物外植体再生能力的决定性因素;种内基因型此种效应不明显;植物基因组中调控再生能力的基因不是性染色体连锁;调控再生能力的基因不存在染色体组倍数的叠加效应。3. 在建立了美洲黑杨高频转化受体系统的基础上,进行了农杆菌介导的耐盐碱基因(OsNHX1)的转化研究;并从工程菌的活化状态、侵染时间等方面阐述了杨树基因转化中的影响因素;采用分级筛选的方法,对抗性芽进行筛选,并在筛选生根培养基中生根,得到了转化植株;以未转化植株为阴性对照,以质粒DNA为阳性对照,进行PCR检测。结果表明,转化植株扩增的条带和质粒中的目的条带一致,而未转化植株没有扩增出任何条带,说明外源目的基因已经整合到美洲黑杨基因组上。
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