【摘 要】
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[目的] 探讨超声介导微泡破裂法促进外源性基因定向转移的方法,为肿瘤等疾病的基因治疗研究提供新的思路。 [方法] 本实验分别以报告基因——绿色荧光蛋白(GFP)基因,以及
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[目的] 探讨超声介导微泡破裂法促进外源性基因定向转移的方法,为肿瘤等疾病的基因治疗研究提供新的思路。 [方法] 本实验分别以报告基因——绿色荧光蛋白(GFP)基因,以及目的基因pcDNA3/IFN-γ质粒作为为标记基因,以人大肠癌细胞株SW480为靶细胞,Wistar大鼠的肝脏肿瘤(Walker256)为靶器官,分别以自制白蛋白微泡和声诺维(SonoVue)微泡作为载体,通过超声介导微泡破裂法促进外源性基因的定向转染,以锥虫蓝染色法检测超声作用于体外细胞的安全性,以激光共聚焦显微镜来定性和半定量观察GFP在靶细胞的表达情,以免疫组织细胞化学方法检测IFN-γ基因的表达。 [结果] 显示当超声的强度为0.75 W/cm~2,作用时间为40s时,对体外培养细胞活性无明显影响;自制白蛋白微泡和声诺维微泡的浓度为10%时,分别达到最佳的基因转染效率,两者没有显著差异,但后者的相对表达强度较高。因此,选择声诺维微泡进行进一步的细胞学和动物学研究。超声介导声诺维微泡破裂法促进pcDNA3/IFN-γ基因转染SW480细胞的实验显示,实验组细胞的培养上清中的IFN-γ量高于对照组,而且对细胞周期的抑制作用也优于对照组,显示有一定的抗肿瘤效果。在荷瘤动物模型的实验中,超声介导声诺维微泡破裂法促进报告基因(GFP)和目的基因(pcDNA3/IFN-γ)的转染,也
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