论文部分内容阅读
第一部分：CD105+SMSCs的分离与成软骨能力的评估目的：比较CD105+SMSCs与CD105-SMSCs的成软骨能力。方法：获取人滑膜组织,传代分离法得到滑膜间充质干细胞(SMSCs),通过流式细胞仪分选出CD105+SMSCs和CD105-SMSCs。而后将实验分为两组：CD105+SMSCs组、CD105-SMSCs组。将细胞分别种植于12孔板中,在种植后第3天、第7天和第14天进行细胞增殖能力检测(WST-1法)；在种植后第14天进行Ⅱ型胶原染色,RT-qPCR检测两组细胞Ⅱ型胶原、aggrecan、SOX9的mRNA表达水平。结果：传代分离获取的SMSCs为纺锤形或卫星形。两组细胞在光镜下的形态相似。CD105-SMSCs组CD105免疫荧光染色大多数呈阴性表达,而CD105+SMSCs组细胞大多数呈阴性表达。CD105"SMSCs组细胞和CD105+SMSCs组细胞WST-1检测的od值分别为第3天0.329±0.0120VS0.376±0.012,第7天0.524±0.007VS0.581±0..009,第14天0.658±0.032VS0.702±0.099,三个时间点中两组数据之间均有统计学差异(P<0.05)。第14天时CD105+SMSCs组细胞Ⅱ型胶原染色比CD105-SMSCs组细胞深,RT-qPCR检测结果用2-△△CT值表示,col Ⅱ、 SOX9、aggrecan的2-△△CT值CD105+SMSCs组分别是CD105-SMSCs组的2.937±0.899倍、10.676±2.276倍、4.282±0.463倍,三组数据均有统计学差异(P<0.05)。结论：通过FACS分选得到CD105+SMSCs,分选的过程对于CD105+SMSCs的成软骨能力无明显不良影响,CD105+SMSCs的成软骨能力较CD105-SMSCs强。第二部分：单抗CD105-ABBS筛选SMSCs的实验研究目的：评价单抗CD105-biotin-avidin系统(CD105-ABBS)对CD105+SMSCs的筛选价值和对SMSCs成软骨能力的影响。方法：实验分两组：ABBS组和CD105-ABBS组。在细胞爬片上分别构建ABBS和CD105-ABBS,再将构建好系统的两组爬片同时放入一个盛有SMSCs悬液的培养皿中,然后放入细胞培养箱中孵育。30min后将细胞爬片取出,震荡洗脱未黏附的细胞。计算两组爬片黏附的细胞数量,CD105免疫荧光检测两组黏附的细胞CD105表达的差异；将细胞爬片放入12孔板中,在加入软骨诱导液第3天、第7天、第14天行细胞增殖能力检测(WST-1法)；第14天同时进行进行Ⅱ型胶原染色和RT-qPCR检测。结果：30min时ABBS组和CD105-ABBS组黏附细胞数量分别20.33±5.43VS40.67±7.54(个/100倍镜视野),两组数据有统计学差异(P<0.05);CD105+SMSCs所占比例为(47.67±7)%VS(72.33±11.93)%,数据有统计学差异(P<0.05)。成软骨诱导第14天时,Ⅱ型胶原染色ABBS组比CD105-ABBS组浅,RT-qPCR检测结果用2-△△CT值表示,col Ⅱ、sox9、aggrecan的2-△△CT值CD105-ABBS组分别是ABBS组的1.835±0.369倍、2.808±0.189倍、3.146±0.552倍,有统计学差异(P<0.05)。结论：CD105单抗快速、选择性的吸附增殖成软骨分化能力强的CD105+SMSCs,为体内软骨的原位再生提供了有效的技术手段,同时对于体外构建组织工程复合物也有一定的借鉴意义,其确切的修复效果有待于体内实验进一步研究。