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目的:本课题旨在研究白头翁皂苷B4对急性肺损伤小鼠的影响及其作用机制,为白头翁皂苷的深入研究提供思路,为中寻找治疗急性肺部损伤提供新的实验依据。第一部分白头翁皂苷B4对急性肺损伤小鼠的影响以及其机制研究方法:60只雄性Balb/c小鼠随机分为对照组、模型组、B4高剂量组(8 mg/kg)、B4中剂量组(4 mg/kg)、B4低剂量组(2 mg/kg)、地塞米松组(5 mg/kg),每组各10只,采用鼻腔内滴入LPS(每只20μg溶于50μL),复制急性肺损伤模型。B4不同剂量组、地塞米松组(5 mg/kg)在模型建立前24 h腹腔注射给药,对照组和模型组给予相等的生理盐水。24 h后再次给药,1 h后建立模型,模型建立12 h后取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF);观察BALF中炎性细胞的分类及数量,苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化;Elisa法检测BALF中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)的含量;Western blot检测NF-κB蛋白水平的变化。结果:模型组小鼠BALF中白细胞,中性粒细胞数量明显上升(P<0.01),白头翁皂苷B4(2 mg/kg)能够显著降低ALI小鼠BALF中中性粒细胞的数量(P<0.05),且对白细胞的数量也有降低趋势;HE染色观察小鼠肺组织,模型组可见明显肺泡间隔变宽,肺泡形状改变,中性粒细胞感染等。白头翁皂苷B4(2 mg/kg)小鼠肺组织炎性细胞较模型组明显减轻,肺部损伤情况也有明显减轻;同时,模型组小鼠BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6含量都显著增多(P<0.01),白头翁皂苷组(2 mg/kg)的IL-6含量明显降低(P<0.05);此外,白头翁皂苷组(2 mg/kg)能够降低急性肺损伤小鼠肺组织中NF-κB蛋白表达水平。结论:白头翁皂苷B4(2 mg/kg)对LPS导致的小鼠急性肺损伤有一定的改善作用,其作用机制可能是经过降低NF-κB蛋白的表达水平,减少炎性因子的释放,从而保护LPS导致的的急性肺损伤。第二部分白头翁皂苷B4对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的影响及机制研究方法:选用RAW264.7细胞进行培养,取对数期细胞进行铺板。随机分组为:正常组,LPS组,白头翁皂苷B4组(10μg/mL),白头翁皂苷B4组(1μg/mL),加入不同浓度的B4作用24h后加入LPS(1μg/mL),24h后收集细胞上清液,Griess法测定细胞培养上清中NO含量;Elisa法检测上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量;Western Blot法检测细胞中MD2/MyD88/NF-κB/MAPK信号通路中关键蛋白的表达。结果:经LPS作用后,细胞培养上清中的NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量明显上升(P<0.01),白头翁皂苷B4各剂量均能够显著减少NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量(P<0.01),且呈依赖性;同时,与模型组相比,白头翁皂苷B4能够有效下调MD2、MyD88、p-IKK、p-IκB、p-NF-κB、p-p38、p-JNK、p-ERK的表达。结论:白头翁皂苷B4对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞有较好的抗炎保护作用,其机制可能与调节MD2/MyD88/NF-κB/MAPK信号通路相关。