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目的:应用稳定过表达GLUT4wmyc的C2C12-GLUT4myc小鼠骨骼肌细胞和L6-GLUT4myc大鼠骨骼肌细胞,研究黄酮衍生物对骨骼肌细胞GLUT4myc转位的影响。进一步通过相关mRNA的表达、信号分子蛋白表达及其磷酸化水平的测定,初步研究黄酮衍生物抗糖尿病作用的分子机制。方法:1.ELISA方法测定本实验室前期合成的22种黄酮衍生物对C2C12-GLUT4myc小鼠骨骼肌细胞和L6-GLUT4myc大鼠骨骼肌细胞表面GLUT4myc水平的影响。2.MTT方法检测不同浓度的活性化合物对L6-GLUT4m_yc大鼠骨骼肌细胞和C2C12-GLUT4myc小鼠骨骼肌细胞细胞生长的影响。3.Western blot方法检测活性化合物对C2C12-GLUT4wmyc小鼠骨骼肌细胞和L6-GLUT4myc大鼠骨骼肌细胞内GLUT4和5’-AMP激活蛋白激酶的蛋白表达的影响。4.Western blot方法检测强活性黄酮衍生物对5’-AMP激活蛋白激酶、乙酰辅酶A羧化酶以及蛋白激酶B磷酸化水平的影响。5.通过强活性黄酮衍生物分别与5’-AMP激活蛋白激酶特异性抑制剂Compound C和胰岛素共同作用于骨骼肌细胞的实验研究黄酮衍生物与5’-AMP激活蛋白激酶以及胰岛素通路之间的关系。6.实时荧光定量PCR方法检测强活性衍生物对C2C12小鼠骨骼肌细胞和L6大鼠骨骼肌细胞过氧化物酶体增殖激活受体-α、过氧化物酶体增殖激活受体-γ、过氧化物酶体增殖激活受体-δ、脂肪酸合成酶基因表达的影响。结果:1.22种黄酮衍生物可不同程度的增加L6-GLUT4myc大鼠骨骼肌细胞膜表面GLUT4wmyc的含量,其中D1、D8、D18增加大鼠骨骼肌细胞L6-GLUT4myc细胞膜表面GLUT4wmyc水平的作用较强,并具有剂量依赖性和时间依赖性(p<0.05)。2.D1、D8、D18在10μg/mL浓度时,L6-GLUT4myc大鼠骨骼肌细胞的细胞生长均未受到明显影响(P<0.05)。D1、D8、D18在1μg/mL浓度时,C2C12-GLUT4myc小鼠骨骼肌细胞的细胞生长均未受到明显影响(p<0.05)。3.D1、D8、D18不影响小鼠骨骼肌细胞C2C12-GLUT4myc和大鼠骨骼肌细胞L6-GLUT4wmyc的GLUT4及5’-AMP激活蛋白激酶的蛋白表达量。4.D1、D8、D18 上调 C2C12-GLUT4wmyc 和 L6-GLUT4myc 细胞 5’-AMMP 激活蛋白激酶,乙酰辅酶A羧化酶的磷酸化水平(p<0.05),而不影响蛋白激酶B的磷酸化水平。5.D1、D8、D18和胰岛素的叠加实验结果表明,两者促进L6-GLUT4wmyc的GLUT4wmyc转位作用具有协同作用,5’-AMP激活蛋白激酶特异性抑制剂Compound C 显著抑制 D1、D8、D18 对 C2C12-GLUT4myc 细胞 GLUT4myc转位的促进作用(p<0.05)。6.D18降低C2C12小鼠骨骼肌细胞和L6大鼠骨骼肌细胞过氧化物酶体增殖激活受体-γ、脂肪酸合成酶基因的表达,升高过氧化物酶体增殖激活受体-α、过氧化物酶体增殖激活受体-δ基因的表达;D1、D8、CN对两种细胞的过氧化物酶体增殖激活受体-α、过氧化物酶体增殖激活受体-γ、过氧化物酶体增殖激活受体-δ、脂肪酸合成酶基因表达未见影响。结论:1.D1、D8、D18 增加 C2C12-GLUT4wmyc 小鼠骨骼肌细胞和 L6-GLUT4myc 大鼠骨骼肌细胞膜表面GLUT4myc的水平,促进GLUT4myc的转位。2.D1、D8、D18 不影响 C2C12-GLUT4myc 和 L6-GLUT4myc细胞 GLUT4 和5’-AMP激活蛋白激酶的蛋白表达,上调C2C12-GLUT4myc和L6-GLUT4myc细胞内5’-AMP激活蛋白激酶及乙酰辅酶A羧化酶的磷酸化水平,而不影响蛋白激酶B的磷酸化水平。3.D1、D8、D18和胰岛素的叠加实验结果表明,黄酮衍生物与胰岛素具有协同促进L6-GLUT4myc细胞GLUT4的转位作用。4.Compound C 抑制了 D1、D8、D18 对 C2C 12-GLUT4myc的 GLUT4 转位促进作用,提示AMPK途径介导黄酮衍生物促进GLUT4转位的作用。5.D18对C2C12小鼠骨骼肌细胞和L6大鼠骨骼肌细胞过氧化物酶体增殖激活受体-α、过氧化物酶体增殖激活受体-γ、过氧化物酶体增殖激活受体-δ、脂肪酸合成酶基因表达的影响与D1、D8、CN不同。