论文部分内容阅读
目的本研究目的在于探索雷公藤红素对胃癌细胞BGC-823增殖及有氧糖酵解的影响,探究雷公藤红素能否调节有氧糖酵解从而抑制胃癌细胞BGC-823的增殖。方法用雷公藤红素处理胃癌细胞BGC-823细胞后,MTT实验检测细胞活性,克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率与周期分布,并于光镜下观察细胞生长及形态;分光光度计法检测细胞的葡萄糖消耗量、乳酸生成量以及己糖激酶(HK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性。蛋白电泳检测正常胃上皮细胞GES与BGC-823细胞内葡萄糖转运体1(GLUT1)、己糖激酶Ⅱ亚型(HKⅡ)、丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达差异,并用实验浓度的雷公藤红素处理BGC-823细胞后检测细胞内部上述蛋白分子的表达情况。结果1、BGC-823细胞经梯度浓度的雷公藤红素分别处理24 h、48 h、72 h后,MTT实验测得加药组细胞活力较对照组下降,雷公藤红素处理BGC-823细胞24 h、48 h、72 h后其IC50值分别为(1.66±0.05)μmol/L、(1.49±0.07)μmol/L、(1.32±0.10)μmol/L(N=3,(?)±SD)。2、BGC-823细胞经实验浓度的雷公藤红素处理10天后,平板克隆形成实验显示,各加药组细胞克隆形成率依次为(57.63±5.78)%、(32.64±3.27)%、(0.38±0.27)%,均明显低于对照组的克隆形成率(77.60±6.41)%(P<0.01),且具有浓度依赖性。3、BGC-823细胞经实验浓度的雷公藤红素作用后,倒置显微镜下观察细胞,随药物浓度增加,培养皿中活细胞数量减少,脱壁悬浮细胞增多,细胞密度下降,细胞形态由椭圆形变为梭形。4、BGC-823细胞经实验浓度的雷公藤红素作用后,对照组与各实验组细胞凋亡率依次为(14.90±0.87)%、(18.12±0.50)%、(19.15±0.04)%、(24.15±1.76)%,加药后细胞凋亡增加(P<0.05),且具有浓度依赖性。5、BGC-823细胞经实验浓度的雷公藤红素作用后,细胞有丝分裂受阻,滞于G2/M期。6、雷公藤红素抑制BGC-823细胞有氧糖酵解中葡萄糖的利用(P<0.05)及乳酸的生成(P<0.01),具有浓度依赖性。7、与胃上皮细胞相比,胃癌细胞中GLUT1、HKⅡ、LDHA的蛋白表达升高(P<0.05),PKM2的表达下降(P<0.05);在BGC-823细胞中,雷公藤红素可抑制有氧糖酵解过程中关键因子GLUT1、HKⅡ、LDHA的蛋白表达(P<0.05),但并不影响PKM2的表达(P>0.05)。8、雷公藤红素对BGC-823细胞有氧糖酵解过程中HK和LDH活性的抑制作用不显著,在浓度达到1.5μmol/L时才可抑制HK活性(P<0.05),浓度达到1.5μmol/L才可抑制LDH活性(P<0.05)。结论雷公藤红素可直接抑制胃癌细胞BGC-823中GLUT1及有氧糖酵途径中关键酶HKⅡ、LDHA,并在高浓度时抑制HK与LDH酶活性,从而阻碍BGC-823对葡萄糖的摄取利用与乳酸生成,抑制BGC-823细胞的有氧糖酵解,削减了细胞能量及生物大分子合成所需原料的供应,阻碍细胞周期进展并促进细胞凋亡,使胃癌细胞生长增殖受到抑制。