体外培养虹膜色素上皮细胞移植对RCS鼠视网膜变性的治疗作用及其机制的实验研究

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全文共四章.第一章,牛眼IPE细胞的培养;目的:培养获得纯化的IPE细胞,对其培养条件进行优化,并对体外培养中IPE细胞的形态学特点进行观察.结论:酶辅助的显微分离法是一种高效的细胞分离方法,可获得IPE细胞的纯化培养.含20﹪胎牛血清的DMEM培养基为IPE细胞的理想培养基.体外培养中,IPE细胞具有与RPE细胞相似的细胞形态和极性;移植于视网膜下腔后,IPE细胞具有重新构建血-视网膜外屏障的能力.深低温保存可作为体外培养IPE细胞长期保存的方法,可为进一步进行IPE细胞的相关研究提供稳定的细胞来源.第二章,IPE细胞的潜在生物学功能;目的:(1)对体外培养牛眼IPE细胞的维生素A代谢功能进行评价.(2)明确IPE细胞对视网膜感光细胞外节盘膜(ROS)的吞噬功能及其分子基础.(3)明确FasL在体外培养IPE细胞中的表达情况及意义.结论:(1)IPE细胞具有与RPE细胞相似的维生素A转运和代谢功能.(2)IPE细胞可表达甘露糖受体,具有与RPE细胞相拟的特异性ROS吞噬功能.(3)在前房免疫赦免的形式中,角膜内皮细胞主要通过表达和分泌Fas-L发挥作用,而IPE细胞则主要通过表达和分泌有免疫抑制作用的细胞因子以及通过一种非Fas-FasL诱导细胞凋亡的通路来阻止T细胞活化、增殖.第三章,IPE细胞移植对RCS鼠视网膜变性的疗效观察;目的:在体外实验证明IPE细胞具有与RPE细胞相似的维生素A储存、转运和代谢功能,以及相似的ROS吞噬功能的基础上,进一步观察IPE细胞移植对RCS鼠视网膜感光细胞变性、死亡的挽救作用.结论:新生牛眼IPE细胞移植于RCS鼠视网膜下腔可以存活,并可对RCS鼠视网膜感光细胞的变性和死亡产生挽救作用.第四章,rAAV-hGDNF转染IPE细胞移植对RCS鼠视网膜变性疗效的初步观察.目的:(1)明确rAAV-hGDNF对IPE细胞的转染效率及转染后hGDNF的表达水平.(2)明确rAAV-hGDNF转染IPE细胞移标致地RCS鼠视网膜变性的治疗作用.结论:rAAV-hGDNF可有效地转染培养IPE细胞,并可有效地表达hGDNF.在现有的转染率和表达水平上,rAAV-hGDNF转染IPE细胞移植并不能增强IPE细胞对RCS鼠感光细胞的挽救作用.
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