目的：　　 本研究拟通过对北京A医院和浙江地区等6家医院收集的共175株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的系统研究，获得碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶产生情况、碳青霉烯酶的特性、表达酶的基因型和分子流行病学信息。为由此类细菌引起的临床感染的治疗提供最佳抗菌药物选择，更为制定防控此类细菌传播提供系统完整的实验数据和参考依据。　　 方法：　　 收集2011年1月至2012年6月临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌175株，采用MIC法检测菌株对药物的敏感性，纸片法表型确证试验检测超广谱β内酰胺酶(ESBL)，改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型。PCR、DNA测序以及Blast比对等方法确定菌株碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶基因型。重复序列聚合酶链反应(REP-PCR)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术和多位点序列分型(MLST)分析菌株同源性，并对3种分型方法进行比较。　　 结果：　　 1.药物敏感性试验结果175株肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、呋喃妥因、复方磺胺甲噁唑和环丙沙星等药物耐药率较高，其耐药率在72％以上。有168株对厄他培南耐药，耐药率高达96.0％(168/175)，7株对厄他培南敏感菌株但表现对亚胺培南或美罗培南耐药，因此，受试的175株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类均为表型耐药。对米诺环素、四环素、阿米卡星和妥布霉素耐药率在11.4％～57.7％。未检到对替加环素耐药株，但检出中介菌株15株。　　 2.改良Hodge试验与ESBLs表型试验结果175株肺炎克雷伯菌中改良Hodge试验阳性140株，阳性率80.0％(140/175)，ESBLs表型试验阳性50株，占28.6％(50/175)。　　 3.耐药酶基因检测及序列测定结果102株携带blaKPC-2基因，占58.3％(102/175)，6株携带blaIMP4基因，占3.4％(6/175)。11.4％(20/175)携带blaDHA-1基因。有89.1％(156/175)株携带blaSHV基因，63.4％(111/175)菌株携带blaTEM基因，50.3％(88/175)菌株携带blaCTX-M基因。66.9％(117/175)菌株同时具有3种以上耐药基因。　　 4.同源性分析结果使用REP-PCR对175株菌株进行指纹图谱分析，扩增条带数3～8条，产物最长1600bp，最短200bp，分为12个谱型，其中以G型为主，共有71株，占40.6％，其次为F型有35株，占20.0％。北京地区以G型为主，占55.6％(70/127);杭州地区以F型为主，占55.6％(25/45)。　　 5.3种分型方法比较结果随机抽取38株试验菌株，并比较3种分型方法的检测结果。REP-PCR将38株菌分为8个谱型，其中以G型为主，有14株，占36.8％(14/38)，其次为F型有13株，占34.2％(13/38)。MLST将38株菌分为6个序列型，其中以ST87型为主，共有27株，占71.1％(27/38)，其次为ST88型有6株，占15.8％(6/38)。PFGE将38株菌分为6个谱型，12个亚型。其中以A型为主，共有18株，占47.4％(18/38)，其次为C型有10株，占26.3％(10/38)。　　 结论：　　 1.碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌在体外药敏试验中，对多种抗生素耐药率较高，对替加环素显示了较高的敏感率，临床可考虑使用替加环素治疗此类细菌引起的感染。　　 2.碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌以blaKPC-2基因型为主，其次为blaIMP-4基因型;ESBLs以blaCTX-M-14基因型为主。　　 3.REP-PCR结果显示某些医院存在克隆株流行，北京A医院与杭州地区流行株不同，北京A医院以G型为主，杭州地区以F型为主。　　 4.3种分型方法分辨率不同，REP-PCR与多位点序列分析分辨率相同，弱于脉冲场凝胶电泳。REP-PCR、PFGE与MLST的结果具有较好的一致性，但是在对ST87菌株的区分上，REP-PCR、PFGE和MLST存在部分的差异。与REP-PCR和PFGE相比，MLST对菌株同源性的判定更为保守，可以反映菌株较长时间内的进化关系。