目的通过对卵巢上皮细胞癌病例中Cyclin H的表达情况及其与临床病理、生存之间的关系,以及干预卵巢癌细胞Cyclin H的表达对细胞生物行为改变的研究,探讨Cyclin H在卵巢癌发生及发展中的作用及其可能的机制。方法1、在组织水平,选取60例不同病理分级的卵巢癌标本,按照组织分级分,其中G1期20例,G2期16例,G3期24例；按照组织类型分,其中浆液性乳头状腺瘤42例,子宫内膜样腺瘤7例,透明细胞瘤3例,粘液样腺瘤8例；按照FIGO临床分期分,其中Ⅰ期15例,Ⅱ期6例,Ⅲ期31例,Ⅳ期8例。采用免疫组化方法,检测Cyclin H、p-CDK2及增殖指标Ki-67的表达情况,与各临床参数之间的关系及对生存的影响,SPSS15.0统计软件分析数据。2、在细胞水平,采用血清饥饿合并释放同步化处理卵巢癌细胞,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot及核浆分离技术检测Cyclin H及相关分子的表达。构建Cyclin H过表达、核定位缺失及干扰表达载体,并稳定转染细胞株,MTT法、Western blot、核浆分离、Transwell及免疫共沉淀等实验分析Cyclin H参与卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响及其机制。3、在体内研究水平,采用裸鼠成瘤实验研究Cyclin H对卵巢肿瘤生长的影响。结果1.免疫组化结果显示：在不同组织分级的卵巢癌中,Cyclin H在卵巢癌中的表达水平随肿瘤恶性程度增高而增高,有显著差异(P<0.001)。结合临床资料分析显示：Cyclin H的表达与卵巢癌患者的病理等级(r=0.466；P=0.000)、FIGO分期(r=0.389；P=0.002)、腹水中是否检测出脱落癌细胞(r=0.308；P=0.016)有相关性,病理等级越高,FIGO分期越高,腹水中检测出脱落癌细胞,其表达分级越高；病理等级越低,FIGO分期越低,腹水中未检测出脱落癌细胞,其表达分级越低。Spearman等级相关分析显示：Cyclin H与Ki-67表达呈正相关(r=0.907；P<0.001)；Cyclin H与P-CDK2表达呈正相关(r=0.788;P<0.001)。Kaplan-Meier分析显示：Cyclin H低表达组(≤2+)患者的五年生存率明显高于Cyclin H局表达组(>2+)的患者(P=0.003)。2.构建Cyclin H过表达、核定位缺失及干扰表达载体,筛选稳定转染细胞株,并鉴定。MTT法检测正常的及以上稳定转染的卵巢癌H08910细胞株的增殖情况,过表达Cyclin H能促进H08910细胞的增殖(P<0.05)；抑制Cyclin H的表达能抑制H08910细胞的增殖(P<0.05)；但是过表达细胞核定位序列缺失的CyclinH的H08910细胞的增殖能力无显著差异(P>0.05)。在血清饥饿-释放的H08910细胞增殖模型中,Cyclin H、CDK7及MAT1的表达上调,同时CDK2的磷酸化水平也上调。核浆分离显示在H08910细胞增殖中,胞核中的Cyclin H、CDK7及MAT1表达增加,而胞质中无明显改变。免疫共沉淀显示在H08910细胞的增殖中,Cyclin H与CDK7及MAT1形成复合物的能力上调。Western Blot检测过表达Cyclin H的H08910细胞中的P-CDK2的表达上调,抑制Cyclin H的表达能抑制P-CDK2的水平。3.Transwell实验发现,过表达Cyclin H的H08910细胞的侵袭能力增加(P<0.05)；抑制Cyclin H的表达的H08910细胞的侵袭能力下降(P<0.05)；并且过表达细胞核定位序列缺失的Cyclin H的H08910细胞,细胞的侵袭能力明显增强(P<0.05),且Akt和FAK的磷酸化水平上调。4.干预卵巢癌细胞中Cyclin H的表达能影响卵巢癌细胞体外成瘤能力,表现为过表达CyclinH能促进体外肿瘤的形成,抑制Cyclin H的表达能抑制体外肿瘤的形成。结论1.Cyclin H在卵巢癌中的表达水平随肿瘤恶性程度增高而增高，Cyclin H的表达与卵巢癌患者的病理等级、FIGO分期、腹水中是否检测出脱落癌细胞正相关,Cyclin H的表达与卵巢癌患者的生存时间呈正相关,这表明卵巢癌中Cyclin H的表达在其发生及发展中有重要的作用。2.H08910卵巢癌细胞的胞核中的Cyclin H能与CDK7及MAT1形成复合物,调节CDK2的磷酸化,从而调节卵巢癌细胞的增殖。3.H08910卵巢癌细胞的胞浆中的Cyclin H能调节FAK及Akt的磷酸化水平,从而可能调节细胞的侵袭。总之,Cyclin H在卵巢癌的发生及发展过程中发挥着重要作用,为发现卵巢癌患者早期诊断指标,找到卵巢癌靶向治疗的途径具有重要的理论和实践价值。