ABCG2在人多发性骨髓瘤细胞株中的表达及甲基化调控的研究

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【目的】研究ABCG2在多发性骨髓瘤细胞株中的表达及该基因启动子区甲基化状态对ABCG2表达的影响。同时探索SYBR green I荧光染料基础的实时定量甲基化特异性PCR作为基因组甲基化研究的可行性。【方法】人骨髓瘤细胞株RPMI-8228、U266、XG-7经去甲基化剂5’-AzaDC孵育后,用实时定量逆转录多聚酶链式反应(RQ-RT-PCR)及流式细胞术(FCM)方法分别检测骨髓瘤细胞株ABCG2基因及表面蛋白的表达,使用甲基化特异性荧光定量多聚酶链式反应(MSQ-PCR)检测骨髓瘤细胞株启动子区等位基因甲基化的百分比,MSQ-PCR结束后根据溶解曲线分析判断PCR产物特异性。【结果】三种骨髓瘤细胞株ABCG2基因、蛋白表达水平及启动子区甲基化百分比均不相同,8226细胞株ABCG2基因及蛋白表达水平最高,启动子区呈现完全非甲基化状态。U266细胞株其次,启动子区甲基化等位基因百分比为61.55%±1.98%。XG-7细胞株表达水平最低,启动子区甲基化等位基因百分比为78.40%±2.46%。经去甲基化试剂5’-AzaDC处理后,U266细胞株及XG-7细胞株ABCG2基因及蛋白表达水平均有上升,8226细胞株表达无明显变化。MSQ-PCR结束后,通过分析溶解曲线,甲基化产物和非甲基化产物解链温度分别为77℃和75.5℃。【结论】启动子去甲基化状态增加ABCG2 mRNA和蛋白的表达,骨髓瘤细胞株ABCG2基因和蛋白的表达至少部分受启动子区CpG岛甲基化的调控。此外,一些研究结果已经表明ABCG2表达与PI3K-AKT信号通路调节相关,并且翻译后的蛋白表达被泛素-蛋白酶系统调节。有更高ABCG2表达的细胞系或许具有对化疗药更强的外排性,因而可获的耐药生存。SYBR green I荧光染料基础的实时定量甲基化特异性PCR可以直接计算出基因组甲基化等位基因百分比。
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