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背景与目的:肝纤维化时大量细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积,是多种慢性肝脏疾病进展为肝硬化的中间过程。肝纤维化的并发症多,预后差,严重影响患者的生活质量。迄今没有满意的治疗药物,亟待开发新的治疗方案和药物。新近大量研究表明肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiontensin aldosterone-system,RAAS)众多组分,包括血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE),血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ),血管紧张素Ⅱ受体1(angiotensin Ⅱ type 1 repector,AT1R),血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme2,ACE2)以及血管紧张素(1-7)(angiotensin-(1-7),Ang-(1-7))等,在肝纤维化发生发展过程中扮演重要角色。提示RAAS可能是干预肝纤维新的理想靶点之一。脂氧素(Lipoxins)是花生四烯酸的代谢产物,同时具备抗炎、促炎症消退、抗氧化、抗肿瘤、调节增殖与凋亡等多重生物学效应。脂氧素前体及受体在正常肝脏大量表达,其对肝脏疾病的保护效应越来越受到重视。本课题主要从RAAS角度探讨脂氧素抗肝纤维化效应及其作用机制。实验方法:1、复制肝纤维化模型。40只SD雄性大鼠,180-220 g,随机分成4组,每组10只。分组及处理如下:(1)正常对照组:皮下注射橄榄油,剂量1.8 ml/kg。(2)模型组:皮下注射40%CCL4油剂(橄榄油为溶剂),剂量3 ml/kg,每周2次,共10周。(3)BML-111组:皮下注射Lipoxin受体激动剂BML-111,剂量1 mg/kg,30 min后处理同模型组,每周2次,共10周。(4)BOC-2组:皮下注射Lipoxin受体阻断剂BOC-2,剂量50μg/kg,30min后处理同BML-111组,每周2次,共10周。2、确证脂氧素的抗肝纤维化效应。(1)HE染色:镜下观察肝组织和细胞的结构形态变化,以及炎症反应程度。(2)Masoon染色:镜下定性观察胶原纤维在肝脏组织内的沉积情况。(3)检测羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量:定量检测胶原纤维的沉积水平。(4)检测血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT))活性:评价肝功能情况。3、探索脂氧素抗肝纤维化的作用机制。(1)检测肝组织中ACE和ACE2的活性。(2)qPCR检测肝组织Ang Ⅱ、Ang-(1-7)、AT1R、Mas的mRNA表达水平。(3)ELISA法检测血清和肝组织中ACE、ACE2、Ang Ⅱ、Ang-(1-7)的含量。(4)Western Blot检测肝组织中Ang Ⅱ、AT1R、Ang-(1-7)、Mas的蛋白含量。结果:1.BML-111减轻CCL4诱导的肝脏损伤,并且抑制炎症反应。2.BML-111减轻CCL4所致的胶原沉积程度。3.BML-111抑制血清中AST和ALT的活性。4.BML-111减少CCL4诱导的血清和肝组织中ACE的含量。5.BML-111抑制肝脏组织中ACE的活性。6.BML-111降低CCL4诱导的血清和肝组织中Ang Ⅱ的含量。7.BML-111抑制CCL4诱导肝组织中Ang Ⅱ和AT1R的基因和蛋白表达水平。8.BML-111增加肝组织中ACE2的含量和活性。9.BML-111增加肝组织中Ang-(1-7)的含量。10.BML-111上调肝组织中Ang-(1-7)和Mas的基因和蛋白表达水平。结论:脂氧素激动剂BML-111具备抗肝纤维化效应,其抗肝纤维化效应可能与调节ACE-AngⅡ-AT1R轴和ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴平衡相关。