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第一部分 成人大隐静脉内皮细胞的培养 目的:探讨培养成人大隐静脉内皮细胞的有效方法。 方法:采用胶原酶Ⅱ(0.2%)消化法收集大隐静脉内皮细胞,原代培养高密度种植(1.5×104个/cm2),传代培养低密度种植(0.8×104个/cm2),胰酶(0.25%)-EDTA(1mm01·L-1)消化,1:3传代。 结果:原代培养细胞:12~24小时(h)贴壁70%-80%,2-3天(d)开始生长、延伸,12.0±2.3d细胞90%汇合,原代培养获取细胞数7.0×104个/cm2。传代培养细胞:0.5~2h贴壁80%-90%,3~5h开始生长,7.0±1.1d长满瓶壁。传代细胞较原代细胞易于贴壁,生长旺盛。形态学可见细胞呈扁平状单层排列,梭形或多角形,典型的呈“铺路石”状改变;CD31相关抗原免疫荧光染色标记可见内皮细胞呈特异性黄绿色荧光;超微结构观察可见细胞表面有微绒毛,细胞浆内特异性的长杆状Weibel—Palade(WP)小体。 结论:该方法方便、有效,为组织工程种子细胞及细胞组织工程的研究、应用提供了新的途径。 第二部分 同种心脏瓣膜的去细胞研究 目的:构建去内皮细胞的同种心脏瓣膜和去全部细胞的同种心脏瓣膜,研究其组织学、物理学、生物化学、免疫学及生物力学特性,探讨生物学性能稳定、免疫原性低的同种心脏瓣膜,为细胞化组织工程同种心脏