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视网膜色素上皮细胞（the retinal pigment epithelium，RPE）在功能异常、病变或死亡时会引发多种严重的视网膜疾病。对于这些疾病，目前普遍采用的是细胞移植治疗方法。但是，由于细胞来源有限，并存在免疫排斥反应，RPE移植治疗有很大局限性。为此，需要人工体外生产大量的RPE用于视网膜相关疾病的治疗。但是目前人们对于RPE分化机制还了解不够，迫切需要对其分化机制深化研究。本实验室之前已经探索过RPE分化过程的情况，得到了较为详细的数据，我在此基础上进一步研究miRNA对RPE分化及去分化的机制。本研究选择ARPE-19及hfRPE两个不同的RPE系作为研究材料，针对RPE分化相关信号通路中的关键成员，分析其潜在的miRNA作用靶点，找到可能对其起调控作用的miRNAs。然后通过QPCR检测，免疫染色，流式细胞周期分析及双荧光酶标报告基因验证等方法，确定了miR-204/211对RPE分化及去分化的关键调控作用。研究结果小结如下：1.通过文献挖掘及生物信息学分析，我们获得了一批可能调控RPE分化和功能维持的miRNAs。采用QPCR方法鉴定出在两个细胞系中均高表达的miRNAs。其中包括miR-204/211/194等。2.为了鉴定miR-204/211对RPE的影响，我们首先在两个细胞系中瞬时转染miRNA mimics。QPCR检测发现RPE特异性基因RPE65、CRALBP、TYRP2在ARPE-19和hfRPE两个细胞系中表达量都有显著性提高；转染miR-204/211antagomirs后，上述基因表达量都有显著性下调；但转染miR-204/211antagomirs后10天检测，这些基因的表达量又会逐渐回升。细胞免疫染色结果也印证了QRCR的结果。3.在正常的培养条件下，ARPE-19和hfRPE两个细胞系均具有良好的生长能力，细胞呈现典型的S型生长曲线。CCK-8检测细胞在传代培养后第三天即可进入对数生长期，第六天后达到平台期。随后细胞的增殖能力逐渐减弱，进入平台期，细胞的OD值趋于稳定，维持在2.0-2.2左右。进一步通过PI染色法，流式鉴定miR-204/211含量变化对ARPE-19、hfRPE两个细胞系细胞周期的影响，发现上调miR-204/211对细胞周期没有影响，而下调miR-204/211后，对细胞周期有显著性影响。以上结果表明，miR-204/211共同作用能够有效地影响RPE的分化及去分化，并且这种影响可能跟细胞周期调控密切相关，这就进一步明确了miR-204/211对RPE调控的重要性。随着研究的深入，靶基因的确定及作用方式的阐明，两者之间的内在调控作用将不断被发现，与之相关的直接或间接分子机制及信号通路也将会逐步确立，这将会为miR-204/211调控包括RPE异常等常见临床疾病提供新的治疗思路。