试验一模拟胃液对纳米氧化铜和微米氧化铜稳定性的影响　　 本试验以铜离子选择电极法检测不同时间不同pH条件下样品溶液中铜离子的浓度，探索人工胃液对纳米氧化铜和微米氧化铜稳定性的影响，确定纳米氧化铜在不同pH条件下的存在状态，推论纳米氧化铜在消化道内吸收的机制。结果显示，40min时各试验组Cu2+浓度达到较稳定的状态，以后变化均不显著（P＞0.05）;pH2-4时各试验组Cu2+浓度均显著（P＜0.05）高于pH5-7时，纳米氧化铜组显著高于氧化铜组（P＜0.05）;人工胃液中纳米氧化铜组Cu2+浓度显著高于非胃液组（P＜0.05），且在pH2-4时最为明显，人工胃液对微米氧化铜影响不显著(P＞0.05)。可见，随着pH值的降低各试验组Cu2+浓度均升高，纳米氧化铜组更为明显且始终高于微米氧化铜组，表明H+可以诱导纳米氧化铜溶解产生Cu2+，胃蛋白酶会抑制H+对纳米氧化铜的溶解作用，而对微米氧化铜影响不大，这可能与纳米氧化铜表面超强的化学活性有关。　　 试验二鸡原代肝细胞培养方法的建立　　 为获得数量大及活力好的成年鸡肝细胞，本文分别采用改良原位二步灌流法分离肉鸡的肝细胞，并对分离的细胞活性及细胞形态进行分析。每隔24h换液一次，并用倒置显微镜观察细胞形态并收集上清，检测肝细胞上清液中LDH活力，以鉴定原代肝细胞活力。结果显示，采用改良的原位二步灌流法可以获得大量的活力高的肝细胞，且在改良的含血清培养基中可持续培养6d，为下一步试验打下良好的基础。　　 试验三纳米氧化铜对鸡原代肝细胞培养基质中肝酶活性的影响　　 采用原位两步灌流法获得鸡原代肝细胞稀释成1×106个/mL，接种于细胞培养瓶中，每瓶5mL，培养48h后随机分为13组，每组3个重复。第1组为对照组，第2-5、6-9和10-13组分别以硫酸铜、氧化铜和纳米氧化铜的形式添加铜2、4、8和16mg/L，继续培养24h后检测上清中AKP、AST、ALT、γ-GT和LDH活性。结果显示，以硫酸铜形式添加铜2-16mg/L、以氧化铜形式添加铜8-16mg/L和以纳米氧化铜形式添加铜16mg/L，培养基质中γ-GT活性均显著高于对照组（P＜0.05）;添加铜2mg/L时，硫酸铜组γ-GT活性显著高于纳米氧化铜组（P＜0.05），添加铜8mg/L时，氧化铜组γ-GT活性显著高于纳米氧化铜组（P＜0.05）。添加铜2mg/L时，硫酸铜和氧化铜组AST和LDH活性显著高于对照组和纳米氧化铜组（P＜0.05）。添加铜2mg/L时，氧化铜组ALT活性显著高于纳米氧化铜组（P＜0.05）。添加铜8mg/L时，硫酸铜和氧化铜组AKP活性显著高于对照组和纳米氧化铜组（P＜0.05）。表明基质中铜达到2mg/L时，纳米氧化铜比硫酸铜、氧化铜更有利于肝细胞生长，纳米氧化铜对体外培养肝细胞的损害作用低于硫酸铜和氧化铜。　　 试验四纳米氧化铜对鸡原代肝细胞铜蓝蛋白mRNA表达的影响　　 采用原位两步灌流法获得鸡原代肝细胞稀释成1×106个/mL，接种于细胞培养瓶中，每瓶5mL，培养48h后随机分为13组，每组3个重复。第1组为对照组，第2-5、6-9和10-13组分别以硫酸铜、氧化铜和纳米氧化铜的形式添加铜2、4、8和16mg/L，继续培养24h后，用实时荧光定量PCR法检测肝细胞CPmRNA表达量。结果显示，添加铜2-8mg/L时，肝细胞CPmRNA表达量显著高于对照组（P＜0.05）;添加铜2mg/L时，纳米氧化铜组肝细胞CPmRNA表达量显著高于氧化铜组（P＜0.05），氧化铜组显著高于硫酸铜组（P＜0.05）;肝细胞CPmRNA表达量随铜添加量的增加而降低。表明基质中铜达到2mg/L时，纳米氧化铜可以显著提高肝细胞CPmRNA的表达量。