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近年来，鸡新城疫（ND）、禽流感（H9亚型）以及大肠杆菌病的混合感染越发频繁，给养殖业带来了极大的危害，研发预防三种疾病的联苗迫在眉睫。本研究制备了油佐剂和铝胶佐剂的鸡新城疫（ND）、禽流感（H9亚型）、大肠杆菌（O2、O35、O78）病三联灭活疫苗（简称新流大）并对其免疫保护效果等相关试验进行了研究，主要研究内容如下： 试验一鸡大肠杆菌O抗原血清型调查及耐药分析 本试验从山东、辽宁、河北和甘肃等省部分地区养殖场送检的病死鸡中分离鉴定了93株大肠杆菌，通过O抗原定型鉴定75株分别属于17个血清型，18株未鉴定出血清型，其中O35、O2、O14、O78为优势血清型；46株代表菌株药敏试验显示：对林可霉素、阿莫西林、氨苄西林、卡那霉素、庆大霉素、红霉素、头孢曲松等临床常用药产生了不同程度的耐药性；超过50%的分离株对阿莫西林、卡那霉素、庆大霉素、红霉素产生耐药性，仅21%-33%分离株对氧氟沙星、头孢噻肟、阿米卡星、阿奇霉素等药物敏感性稍高。 试验二鸡大肠杆菌O35血清型候选疫苗株的筛选 本试验对5株O35血清型候选疫苗株（E01、E02、E03、E04、E05）以攻毒剂量5х108 CFU分别对7日龄SPF鸡和KM小鼠进行致病性试验，SPF鸡死亡率为80%-90%，小鼠死亡率为90%-100%，5株候选疫苗菌株均为致病性菌株。以a、b两种抗原量分别制备了油佐剂和铝胶佐剂的灭活疫苗并进行SPF鸡免疫保护试验。结果显示：免疫后21 d， a抗原含量的E02菌株油苗和铝胶苗保护率均为80%，其他菌株制备的疫苗保护率均低于80%；b抗原含量的E02、E03、E04菌株油苗的保护率分别为100%、80%、90%，E02、E04菌株的铝胶苗保护率分别为100%、80%，其他菌株制备疫苗保护率均低于80%。综合试验结果，E02候选疫苗株免疫原性最好，b抗原含量制备的疫苗效果优于a抗原含量。 试验三两种不同佐剂鸡新城疫、禽流感（H9）、大肠杆菌病三联灭活苗免疫保护效果比较 本试验以b抗原含量分别制备了油佐剂和铝胶佐剂的新城疫、禽流感（H9）、大肠杆菌（O2、O35、O78）病三联灭活苗，7日龄免疫SPF鸡，设纯抗原和空白对照组。免疫后7 d、14 d、21 d、28 d检测ND和H9抗体水平，免疫后14 d、21 d分别以5.6х106 CFU、2х107 CFU、5х106 CFU进行大肠杆菌O2、O35、O78攻毒。结果显示：免疫后14 d、21 d、28 d，油苗中ND和AI（H9）的HI效价均显著（p<0.05）高于铝胶苗；免疫后21 d，ND、AI（H9）的HI效价均达到高峰，油苗和铝胶苗ND的HI效价分别为6.42±0.12、5.48±0.25， AI（H9）的HI效价分别为11.09±0.13、8.03±0.12。免疫后21 d攻毒，油苗、铝胶苗、纯抗原对照O2的保护率均为90%，O35的保护率分别为90%、90%和100%，O78的保护率分别为80%、80%和90%，空白对照组死亡率分别为80%、90%、80%。综合试验结果，b抗原含量油佐剂鸡新城疫、禽流感（H9）、大肠杆菌（O2、O35、O78）病三联灭活苗免疫效果优于铝胶佐剂。