论文部分内容阅读
实验目的：研究白藜芦醇抑制结肠癌HCT116细胞增殖与PI3K/Akt和Wnt/β-catenin信号之间的关系及可能机制。实验方法：采用结晶紫染色、流式细胞术、免疫荧光、报告质粒、HE染色、Western blot、免疫组织化学等技术，研究白藜芦醇抑制HCT116细胞增殖与PI3K/Akt和Wnt/β-catenin信号之间的关系及其可能的机制。具体步骤如下：1.分别采用结晶紫染色、Western blot、PCR和免疫荧光等实验方法,检测白藜芦醇对结肠癌细胞HCT116增殖、凋亡和周期的影响。2.采用裸鼠体内异位成瘤实验，检测白藜芦醇对结肠癌的影响。3.采用RT-PCR和Western blot检测白藜芦醇对HCT116细胞中Akt1、Akt2、Akt1/2、p-Akt1/2水平的影响。4.利用RT-PCR和Western blot检测白藜芦醇对HCT116细胞中PTEN表达的影响。5.利用PTEN抑制剂和重组腺病毒处理细胞，检测在PTEN抑制剂、PTEN过表达或沉默表达后，白藜芦醇对HCT116细胞增殖的影响。同时检测过表达或沉默PTEN后，Akt1/2、p-Akt1/2水平的变化。6.运用报告质粒、Western blot、RT-PCR方法，检测白藜芦醇对HCT116细胞中GSK3β、p-GSK3β和β-catenin水平的影响。实验结果：1.白藜芦醇抑制HCT116细胞增殖和诱导其凋亡，并具有明显的周期阻滞作用。2.白藜芦醇抑制裸鼠体内异位成瘤肿瘤的生长。3.白藜芦醇明显促进HCT116细胞中PTEN的表达。4.过表达PTEN增强白藜芦醇对HCT116细胞增殖的抑制作用，沉默表达PTEN或PTEN抑制剂能减弱白藜芦醇对HCT116细胞增殖的抑制作用。5.白藜芦醇能抑制p-Akt1/2蛋白水平，并在外源性过表达PTEN后抑制进一步增强，而沉默表达PTEN后，p-Akt1/2蛋白水平变化不明显。6.白藜芦醇明显抑制HCT116细胞中p-GSK3β蛋白水平，抑制β-catenin/TCF4报告质粒活性，但同时也明显抑制β-catenin的mRNA表达水平。实验结论：白藜芦醇能抑制HCT116细胞增殖、促进凋亡和周期阻滞。这些作用可能与白藜芦醇在结肠癌细胞中通过促进PTEN表达并抑制β-catenin表达，进而抑制PI3K/Akt信号和Wnt/β-catenin信号转导有关。