氨气熏蒸法降解花生及花生粕中黄曲霉毒素方法的研究

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黄曲霉毒素毒性非常强,其中花生最易感染黄曲霉。因此降解和去除花生及其制品中黄曲霉毒素的方法和技术日益受到人们的重视。本研究采用氨气熏蒸法来降解去除花生及其制品中的黄曲霉毒素。用高效液相色谱法(HPLC,配荧光检测器)作为黄曲霉毒素AFB1检测的方法,用花生及花生粕降解前后AFB1含量的变化作为衡量熏蒸效果的指标。氨气熏蒸降解试验首先在单因素试验的基础上设计实施二次通用旋转组合试验,研究各因素对降解率的综合影响并建立回归方程,并在此基础上优化氨气熏蒸条件。研究结果如下:1对花生以及花生粕中黄曲霉毒素的提取方法进行了比较确定。对黄曲霉毒素提取采用乙腈-水(84:16,V/V)提取剂,在料液比1:4时振荡提取1h效果最好。2对样品的净化方法进行了比较确定。采用10000r/min高速离心5min方法对提取液进行净化,黄曲霉毒素的的HPLC色谱图干扰峰较少。且高速离心净化法降低了成本,简化了操作步骤,同时又得到黄曲霉毒素较高的回收率。3黄曲霉毒素的衍生选择了TFA涡旋振荡法,即氮气吹干后加入正己烷和TFA立即于涡旋混合器上剧烈混合30s,静置5min,加入水-乙腈(9:1,V/V)衍生液剧烈混合30s,静置待其分层移取下层液体离心后检测。4对HPLC检测时的流动相进行了比较确定。选用甲醇-乙腈-水(17:17:70,V/V/V)作为流动相时四种黄曲霉毒素的分离度和重现性比较好。花生以及花生粕在选定条件下前处理和HPLC检测,AFB1回收率为74.31%~97.23%,相对偏差为2.73%~4.52%。该检测方法具有较好的精密度、稳定性和重现性,为黄曲霉毒素的进一步降解试验提供了有力的技术支持。5对黄曲霉毒素氨气熏蒸的单因素试验表明:氨气浓度、氨熏温度、时间和含水量对样品中AFB1降解率都有影响,降解率随各因素水平的增大而增大。在单因素试验的基础上采用二次通用旋转组合设计试验,建立氨气熏蒸花生降解AFB1的回归方程,在α=0.10显著水平下剔除不显著项后为:Y=0.83600+0.01542X1+0.04492X3+0.02858X4-0.05404X12-0.02779X32-0.02042X42,经分析得出氨气熏蒸花生降解AFB1最佳条件为:氨气浓度7%、熏蒸温度40℃、时间48h、含水量25%,此时AFB1降解效果为83.5%。氨气熏蒸花生粕降解AFB1的回归方程在α=0.10显著水平下剔除不显著项后简化为:Y=0.86486+0.02175X1+0.03275X2+0.01700X3+0.03000X4-0.01965X22-0.06503X32,最佳熏蒸条件分别为:氨气浓度10%、氨熏温度31℃、时间102h、含水量24%,此条件下氨气熏蒸后花生粕中AFB1没有检出,即可认为降解率达100%。
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