多子小瓜虫（Ichthyophthirius multifiliis）是一种世界性分布的淡水鱼类寄生虫，在高密度水产养殖中引起鱼类暴发性感染，可导致大批鱼死亡，造成巨大经济损失。为了有效控制小瓜虫病的发生，研究小瓜虫的体外培养及其基因检测，得到如下结果：1、体外培养基筛选试验：采用含犊牛血清的EMEM（Eagle’s Minimum EssentialMedium）液体培养基、含鳗鱼血清的EMEM液体培养基、含犊牛血清的RPMI1640培养基、含鳗鱼血清的RPMI1640培养基四种培养基，分别按照1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6比例稀释，对小瓜虫的幼虫进行体外培养，观察其存活情况并对虫体个体大小进行测定。结果表明：以含鳗鱼血清的EMEM液体培养基效果最好，虫体存活时间可长达22d，其最优的稀释度为1：1的培养基，虫体的平均直径可达30.17±2.05μm，个体显著大于其他稀释度组（P＜0.05）。2、小瓜虫体外培养生长情况观察：合适的培养基和准确地计数对于评价药物抗小瓜虫的效果是非常必要的，常用的计数虫体数目的方法有血球计数板法、MTT法和CBB法。本研究通过筛选的适宜小瓜虫生长的恰当培养基和较准确的计数方法，来进一步研究小瓜虫体外生长情况。实验确定了能比较准确计数体外培养的小瓜虫的计数方法—MTT法，并且通过准确的计数方法确定了在较优培养基中小瓜虫的生长高峰期是接种后的第8d，其增值倍数可达7.6倍。3、青蒿琥酯等药物对离体培养小瓜虫的作用：运用筛选出的培养基作为基础培养基，用青蒿琥酯和磷酸氯喹以不同的浓度处理体外培养的小瓜虫。实验结果表明青蒿琥酯和磷酸氯喹对体外培养的小瓜虫均有抑制效果，青蒿琥酯24h、48h、96h的LC₅₀分别为1.7mg/ml、1.4mg/ml、1.08mg/ml，磷酸氯喹24h、48h、96h的LC₅₀分别为0.0051mg／ml、0.0035mg/ml、0.0024mg／ml。磷酸氯喹抗体外小瓜虫的效果明显比青蒿琥酯好。青蒿琥酯通过破坏膜系结构，使小瓜虫的Na⁺K⁺ATP酶、SOD、GSH-PX，CAT的活性降低，MDA含量增加，从而对小瓜虫有抑制作用。磷酸氯喹聚集于小瓜虫食物泡内使虫体pH值升高，破坏了膜结构，使小瓜虫的Na⁺K⁺ATP酶、GSH-PX的活性下降，SOD活力、CAT活力、MDA含量上升，起到杀虫的效果。4、小瓜虫的18SrRNA基因的PCR分析：通过对小瓜虫的DNA提取及18SrRNA基因序列扩增方法进行研究，结果表明：体外培养的小瓜虫的浓缩液经裂解后，其DNA可用酚-氯抽提法提取，所提取的DNA OD₂₆₀／OD₂₈₀＞1.8，纯度比较高。以小瓜虫DNA为模板，成功扩增出小瓜虫18SrRNA基因的4个核苷酸片段，其大小分别为292bp、500bp、577bp、366bp。