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研究背景前期课题“高密度cDNA基因芯片筛选小鼠脑发育、损伤相关基因的研究”利用含小鼠发育文库cDNA 7680条的高密度基因芯片,对发育和损伤模型中表达差异的基因进行筛选。结果发现发育过程中高表达基因560个,其中过度表达有34个。这些基因功能广泛,涉及转录调节、信号转导、细胞代谢、免疫调节、细胞骨架、DNA复制修复、细胞粘附等17类。其中一个功能未知的过度表达基因BC023882引人注目,它在胚胎发育和生后早期小鼠的脑组织存在高表达,其中P0 d时相点Cy5/Cy3比值(Ratio值)为7.6038,远远高于2.0000的基因表达差异筛选标准。提示基因BC023882可能在小鼠早期胚胎中枢神经系统的发育过程中起到重要作用。研究方法与结果1.基因BC023882的发育学表达模式及脑区定位。(1)半定量RT-PCR检测基因BC203882在发育小鼠各个阶段的表达情况。分别取小鼠胚胎期时相点(E14、E19 d)及生后发育时相点(P1、P7、P14、P30、P60 d)的小鼠组织。其中胚胎期组织包括脑(brain)和胚体(body),而生后组织包括脑、肝、肾、心、肺和小肠。分别提取上述组织的总RAN,利用RT-PCR技术检测基因023882在上述组织中的表达。我们通过RT-PCR实验观察到基因BC023882的mRNA呈阶段性地表达于脑组织,P1 d达到高峰,P60 d表达消失;其mRNA也少量表达于胚体组织,具体定位有待进一步实验确定;另外P1 d肝组织也有微弱表达,随后迅速消失,而肾脏、肺、小肠和心脏等组织均未检测到该基因表达。(2)用原位杂交技术检测基因BC023882的mRNA在不同脑区中的定位。根据基因BC023882的特异性序列设计RT-PCR引物,扩增后构建在含T7启动子的pcDNA3.1(-)载体中,标记cRNA探针。利用该基因探针对各实验组脑组织进行原位杂交。通过组织原位杂交实验观察:基因BC023882的mRNA的最早出现在E14 d的胚胎脑组织大脑皮层,包括运动皮层、躯体感觉皮层、扣带皮质和梨状皮质;P1 d时杂交阳性细胞出现范围更广,如大脑皮层,内囊、胼胝体、视前区诸核团等等;杂交信号