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单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)作为一种含黄素蛋白酶,结合在线粒体外膜上,通过氧化脱氨来调节体内的单胺水平,单胺类物质是人体内最重要和最普遍的一种神经递质。体内MAO含量异常升高会直接影响着体内单胺类神经递质的含量,两者呈负相关的趋势。MAO分为MAO-A和MAO-B两个亚型,MAO-A在体内的异常升高,会引起抑郁症和焦虑症;MAO-B的异常升高,会引起阿尔茨海默病和帕金森氏病;这些疾病给患者及其家人的生活质量带来了严重的影响。近年来由单胺氧化酶活性异常改变引起的疾病呈上升趋势,且目前尚缺乏针对这些疾病的理想药物,单胺氧化酶抑制剂在治疗神经-精神性系统疾病的过程中发挥了突破性的作用。在已用于临床的单胺氧化酶抑制剂种类较少且多以化学合成为药物来源,虽然这些单胺氧化酶抑制剂在治疗效果方面表现良好,但是其在疾病的治疗中存在肝毒性、肾毒性等许多副作用。开发新颖且副作用低的天然来源的单胺氧化酶抑制剂已成为该领域的研究热点,在已经报道的天然来源的单胺氧化酶抑制剂中,大多数都以药用植物作为来源,从植物内生真菌代谢产物中获取单胺氧化酶抑制剂的研究还鲜有报道。本研究拟从植物内生真菌的代谢产物中筛选能够抑制MAO的天然小分子物质,作为MAO抑制剂或抑制剂的先导化合物。选择来自吉林省长白山、白城、辽源及浙江省宁波的23株新鲜植物,进行植物内生真菌的分离,共分离出150株内生真菌,经形态学鉴定后,这些内生真菌分属于14个属,曲霉属、镰刀菌属、链格孢霉属在所分离的内生真菌中比例最大。选择雄性老龄Wistar大鼠肝脏作为MAO的来源,利用低温差速离心和密度梯度离心法获得MAO粗酶液,测定粗酶液的蛋白含量为0.85mg/m L和单位质量蛋白的酶活力为23.18U/mg。本实验提取的MAO的酶活力与已经报道的文献基本一致,说明提取成功,可以用于后续实验的单胺氧化酶抑制剂的筛选。以150株内生真菌发酵产物的乙酸乙酯提取物为研究样本,筛选具有单胺氧化酶抑制活性的物质。根据参考文献记载,设置发酵产物的浓度为16mg/m L,经实验测得有5株内生真菌的发酵产物具有单胺氧化酶抑制活性,抑制率均在40%以上,有2株的抑制率达到75%以上,编号分别为CBS47-4和NB62-2。对这两株菌进行形态学和分子生物学鉴定,CBS47-4为金黄毛壳菌(Chaetomium aureum),抑制率为77%;NB62-2为土曲霉(Aspergillus terreus),抑制率为78%。对菌株NB62-2进行发酵条件的优化,利用单因素优化确定了液体培养基中碳源、氮源对发酵结果的影响,利用多因素优化确定了培养条件即p H、温度、装液量、接种量、发酵时间5个参数对发酵结果的影响,以单胺氧化酶抑制率和发酵提取物的干重为评估指标,结果以2%葡萄糖为碳源,2%酵母提取物为氮源,以28℃、p H7.0、装液量40%、接种量0.5%、发酵时间7天为最佳发酵条件。优化后的产物干重为35.50mg,抑制率为82.74%,与优化前相比,抑制率提高17.78%,发酵提取物的干重增加58.13%。对菌株NB62-2进行大规模发酵,得到21.24g发酵粗产物,其MAO的抑制率为82.35%,利用硅胶柱层析、薄层色谱、高效液相色谱等分离检测手段,获得纯度为88.43%的组分N7,组分N7在浓度为16mg/m L时,对MAO的抑制率为96.5%,其半数抑制浓度为0.12mg/m L。活性组分N7进行质谱分析,确定其分子量为425.16,为一种小分子物质。对化合物进行MAO-A和MAO-B的选择性抑制活性检测,结果对MAO-A的抑制率为67.25%,其对MAO-B的抑制率为89.53%,推测对MAO-B的选择性更高。本研究通过对单胺氧化酶抑制剂的筛选,最终从土曲霉的发酵产物中筛选到组分N7。查阅相关文献可知,从土曲霉中筛选单胺氧化酶抑制剂在国内外的研究中还未见报道。组分N7对于MAO的抑制活性高于已被报道的其他真菌来源的化合物。本研究从土曲霉的代谢产物中筛选的组分N7可能为单胺氧化酶抑制剂类药物带来新的先导化合物,为今后的药物开发奠定了重要的基础。