第一部分 STGC3基因表达上调对CNE2细胞系蛋白质表达谱的影响 目的:STGC3基因是导师新近克隆的与鼻咽癌相关候选抑瘤基因(GenBank 登录号为AY078383)。本研究利用蛋白质组学方法,探讨STGC3基因表达上调后,对体外培养的人鼻咽癌CNE2细胞系蛋白质表达谱的影响,从而了解该基因在鼻咽癌发生发展中的地位和作用。 方法:分别抽提CNE2、转染空白载体的CNE2和稳定表达STGC3基因的CNE2细胞的总蛋白,利用双向凝胶电泳(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)方法,分离三种细胞系的总蛋白质,凝胶经染色后,采用 Image Master图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异表达的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行质谱分析鉴定,得到相应的肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),数据库搜索鉴定出差异表达的蛋白质。 结果:图象扫描后用 Image Master软件分析,统计CNE2、pcDNA3.1(+)/CNE2和pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞二维电泳图谱的蛋白质点,3种细胞的蛋白质点分别为675±27、660±23和662±18个,并且蛋白质点主要分布在等电点为3.5-8.5,分子量为22kD-80kD的范围内,在STGC3基因高表达后,90-95%的蛋白质表达与对照组一致,5.10%的蛋白质为差异表达,表明STGC3基因的稳定