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目的:肺癌是当今世界上最常见的恶性肿瘤之一,也是当前我国肿瘤死亡的主要原因之一。由于早期肺癌患者往往缺乏明显的临床症状,导致75%的患者就诊时已失去根治性手术的机会,而姑息性手术或常规放化疗仅能够部分改善症状,无法获得良好的缓解率,从而使得肺癌患者的中位生存期仅能达到12~18个月。除此之外,生物治疗也已经在临床治疗肺癌方面得到了广泛的应用,主要包括基因治疗及免疫治疗。而免疫治疗主要包括有细胞因子治疗、特异性主动免疫治疗和过继性细胞免疫治疗等。在人体内存在许多种抗原提呈细胞(Antigen presenting cell,APC,其中功能最为强大的是树突状细胞(Dendritic cells,DC),因此人们也越来越注意到树突状细胞在肺癌治疗中的作用。近年来,大量研究表明K-ras基因突变是非小细胞肺癌发展过程中的一个重要的负性预后因素,而K-ras基因已成为肺癌生物治疗的一个重要靶位。本研究拟通过在体和体外实验,探讨负载不同抗原的DC诱导的肿瘤特异性CTL对肺癌细胞的杀伤效应及其对荷瘤裸鼠的抑制作用。方法:联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导外周血树突状细胞(DC),分别使用表达K-ras突变体的肺癌细胞抗原、单纯K-ras突变体抗原表位肽和K-ras突变体抗原表位肽阳离子纳米颗粒致敏DC,进而通过诱导刺激T淋巴细胞得到特异性的CTL。流式细胞仪测定DC细胞表面标志,MTT法检测CTL细胞在体外对肿瘤细胞的杀伤作用,ELISA试剂盒检测IL-12和IFN-γ表达水平。分别使用肺癌A549、NCH-446细胞系建立荷瘤裸鼠模型评价CTL体内抗肿瘤活性。结果:在体外实验中,与单纯K-ras突变体多肽相比,K-ras突变体表位肽阳离子纳米颗粒在低浓度时即可被DC有效提呈(P<0.05);与负载单纯K-ras突变体多肽和K-ras突变体表位肽阳离子纳米颗粒组相比,负载全瘤抗原组DC诱导产生的CTL对A549(K-ras+)和NCH-446(K-ras-)均有明显杀伤活性(P<0.05);而负载单纯K-ras突变体多肽、K-ras突变体表位肽阳离子纳米颗粒的DC诱导产生的CTL对A549(K-ras+)有特异性杀伤作用,而对NCH-446(K-ras-)细胞无杀伤作用(P>0.05)。体内实验结果显示,负载全瘤抗原的DC诱导产生的CTL对表达K-ras阳性(A549)的肺癌细胞具有较好的抑制作用,而对K-ras表达阴性(NCH-446)的肺癌细胞抑制作用与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论:低浓度的K-ras突变体表位肽阳离子纳米颗粒作用后,短时间内即可被DC有效提呈,且其诱导产生的CTL对表达K-ras突变体的肺癌细胞有特异性的杀伤作用;而负载肿瘤抗原的DC诱导CTL能够显著抑制肿瘤的生长速度进而提高荷瘤裸鼠的生存时间,这一结果为以后的研究奠定了基础,进而可以用于临床。