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肿瘤本质上是基因病，各种环境的和遗传的致癌因素以协同的或序贯的方式引起遗传物质(DAN)损害的主要靶点是原癌基因和/或肿瘤抑制基因。肺癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发生发展与癌基因和/或抑癌基因的改变有关。因此，探讨肿瘤发生发展中基因变化规律及肿瘤防治的有效方法，是肿瘤研究的当务之急。FHIT(Fragile histidine triad)基因是近几年发现的一种抑癌基因，其抑癌机制可能以FHIT蛋白与其相互作用蛋白的结合为主。本研究利用分子克隆技术及原核表达体系，克隆FHIT基因蛋白编码区序列，体外表达FHIT蛋白，目的在于探讨FHIT蛋白的抗肿瘤作用，为恶性肿瘤的防治提供理论和实验依据。本研究的主要内容及结果如下。 1．FHIT基因ORF(Open reading frame)的克隆、鉴定 从正常新鲜甲状腺组织中提取总RNA，应用RT-PCR方法克隆FHIT基因蛋白编码区序列，并构建了原核表达FHIT基因的重组质粒PET-28a(+)—FHIT，用克隆菌株DH5 α进行扩增、鉴定。结果显示：重组质粒酶切与预计相符，DNA序列分析结果与Genebank一致，无突变、插入或丢失。 2．FHIT融合蛋白的表达、鉴定 将经鉴定的原核重组质粒PET-28a(+)-FHIT转化表达宿主BL21(DE3)，用IPTG诱导表达。结果显示：①重组质粒PET-28a(+)-FHIT在表达菌株BL21(DE3)中是稳定的；②IPTG诱导后的日的蛋自{!川交尚效率农.达，以诱一旨5小比j一户星最高;③日的蛋自以包涵体)1一三式存价_;④认、、、冲，~r，}、}。)t鉴足所表达蛋自为特异侧农达. 3.FHIT融合蛋白的纯化、复性 本研究川含6个日1/扫J毛成功纯化了目的蛋白并透析复性。 4.FHIT蛋白对人肺腺癌细胞系Anip973增殖的抑制作用 川复性后的FHIT融含蛋fl质直接作用于体外培芥的Anip973细胞①川MI一‘l一法测足经FHIT融合蛋自处理后Anip973细胞’{一长曲线及肿瘤细胞’!长抑制率。结果显示:FHIT融合蛋自纤l较各对照组细胞’}一长速度减慢，对Anip973细胞抑制率较各对照组增高;②观察Anip973细胞生长情况，结果显示:经FHIT融合蛋自处理后Anip973细胞增殖减低，_月.随FHIT融合蛋自浓度增加癌细胞抑制程度加重，而空载体诱导的蛋白并无此作用，说明这种抑制作用是山FHIT基因编码蛋白所产生的，从而证明FHIT蛋白具有抗肿瘤作用。 以1几研究结果证明:原核表达F}IIT蛋白是一个可靠的、有效的、简便的方法;}少川T蛋自具有一抗肿瘤作用。此为肿瘤的墓础研究和临床治行提供f理论和实验依据。